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SRSF9在乳腺癌中表达及其生物学功能
王文娟;郭欠影;吴正升;目的 探讨丝氨酸/精氨酸富集剪接因子 9（SRSF9）基因对乳腺癌增殖、迁移和侵袭的影响。方法 基于癌症基因组图谱（TCGA）数据库分析SRSF9基因在乳腺癌中表达情况，在乳腺癌细胞中分别构建SRSF9过表达和敲低模型，并使用Western blot进行验证。接着，通过一系列的体外细胞功能实验（克隆形成实验、CCK-8实验、Transwell实验和划痕愈合实验）探索敲低及过表达SRSF9基因对乳腺癌中增殖、迁移和侵袭的影响。结果 TCGA数据库分析结果显示SRSF9在乳腺癌组织中表达水平显著高于正常组织，且其高表达与乳腺癌患者较短的总生存期相关。在人乳腺癌细胞系MCF-7和MDA-MB-231中，SRSF9 敲低组蛋白表达水平降低，细胞克隆形成能力、增殖能力、迁移与侵袭能力较对照组显著降低，反之则增强。结论 SRSF9在乳腺癌中发挥促癌因子的作用，SRSF9的高表达不仅是乳腺癌预后不良的分子标志，还可能成为潜在的干预靶点。
基于网络药理学与实验验证探究Mito-TEMPO对大鼠肝星状细胞凋亡的影响
袁满琴;马利;赵珮伶;王小素;袁棕鸿;刘子浩;黄富豪;罗章旭;王豫萍;目的 基于网络药理学和细胞实验验证探究2，2，6，6-四甲基哌啶-1-氧基-4-氨基-2-氧基乙基(MT)对过氧化氢(H2O2)诱导活化的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)细胞凋亡的作用。方法 以网络药理学为研究手段，先预测MT治疗肝纤维化(HF)的候选作用靶点与相关信号通路，并将目标靶点蛋白与MT进行分子对接和分子动力学模拟初步验证，再进一步结合体外细胞实验验证上述结论。将HSC-T6细胞分为6组：对照组、MT对照组(40μmol/L)、H2O2组(50μmol/L)、MT不同浓度组(20、40μmol/L)和姜黄素组(15μmol/L)。CCK-8法检测细胞活力；细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力；试剂盒检测细胞中氧化应激水平；流式细胞术检测细胞凋亡情况；免疫荧光染色法检测细胞中I型胶原(COLI)的表达；Westernblot检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、COLI与凋亡相关蛋白表达。结果 通过在线数据库筛选并获得147个MT与HF相关的交集靶点，其中涉及B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱天冬酶3(Casp3)等；分子对接和分子动力学模拟结果表明MT与Bcl-2、Casp3结合良好；京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析表明，MT可能通过细胞凋亡途径调控HF进程；体外实验结果显示，MT干预可显著降低HSC-T6细胞的活力与增殖能力，减少丙二醛(MDA)、α-SMA、COLI及Bcl-2水平，同时上调超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、活化的半胱天冬酶3(Cleaved-Caspase-3)水平，促进HSC-T6细胞凋亡。结论 MT可抑制HSC-T6细胞的增殖和活化，其机制可能与促进HSC-T6细胞凋亡有关。
超亲水酰胺/氨基功能化钛涂层促成骨分化研究
陈雅庆;曹颖;郑顺丽;目的 构建一种兼具"纳米形貌调控+表面化学功能化"的超亲水钛涂层，评价其理化性能及其对骨髓间充质干细胞(BMSCs)黏附铺展、增殖和成骨分化的影响。方法 恒电压条件下对钛表面进行阳极氧化制备TiO2纳米管结构，随后在纳米管表面引入丙烯酸以获得丰富–COOH位点，并通过偶联反应进一步接枝2，2′-氧双(乙胺)，构建含–CONH–及末端–NH2的超亲水钛功能涂层。根据样品制备过程，将样品分别分为未处理组、阳极氧化组、阳极氧化后接枝丙烯酸组和阳极氧化后接枝丙烯酸再接枝2，2′-氧双(乙胺)组，以上各组分别用Ti、TNT、TNT-COOH、TNT-NH2表示。采用场发射扫描电镜观察样品形貌特征；通过接触角评价表面润湿性；通过表面ζ电位分析仪测定生理条件下(pH7.4)表面ζ电位来表征表面电性；结合傅里叶变换红外光谱仪(FTIR)与X射线光电子能谱仪(XPS)分析表面元素组成和化学键变化。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法与细胞染色评价生物相容性，在成骨诱导条件下培养，分别通过碱性磷酸酶染色及活性定量、茜素红S染色评价矿化结节形成，从而评估不同表面改性对成骨分化的作用。结果成功构建了“阳极氧化TiO2纳米管+丙烯酸引入–COOH + 2，2′-氧双(乙胺)接枝”的功能化超亲水钛种植体表面涂层。FTIR与XPS结果证实表面–COOH位点成功引入并进一步形成酰胺键结构；改性后样品表面润湿性显著改善，呈超亲水特征，且表面ζ电位发生相应改变。体外实验CCK-8与细胞染色结果显示，与对照组相比，改性组细胞黏附与铺展更充分，细胞活力/增殖水平更佳且未见明显细胞毒性；在成骨诱导条件下，改性组碱性磷酸酶(ALP)表达/活性增强，矿化结节形成增加，表明该表面改性可有效促进早期成骨分化。结论基于阳极氧化在钛表面构建TiO2纳米管结构，并通过丙烯酸引入–COOH位点，进一步接枝2，2′-氧双(乙胺)获得末端–NH2的功能化超亲水表面，成功实现了钛表面“形貌+化学”的协同调控。该改性表面在体外表现出良好的细胞相容性，可促进BMSCs细胞黏附铺展与增殖，并增强成骨相关分化与矿化能力。
囊胚培养液中微量β-hCG快速检测方法的建立及其胚胎潜能评估的初步研究
郑红玉;郝燕;张清;周平;目的 探讨D5囊胚培养液中微量β-人绒毛膜促性腺激素(β-hCG)快速检测新方法对囊胚发育潜能及妊娠结局的辅助预测价值。方法 收集体外受精-胚胎移植/单精子卵胞浆注射(IVF/ICSI)助孕患者的D5单囊胚培养液，采用双抗体夹心荧光免疫层析技术快速检测β-hCG水平；按单囊胚移植后妊娠结局分为妊娠组(n=68)与非妊娠组(n=70)，行多因素Logistic回归与受试者工作特征曲线(ROC)曲线分析。结果 该研究临床妊娠率为49.28%，妊娠组女方年龄显著低于非妊娠组，扳机日内膜厚度、扳机日雌二醇(E2)水平、囊胚培养液中β-hCG浓度均高于非妊娠组(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示，囊胚培养液中β-hCG浓度是影响妊娠结局的重要因素。ROC曲线分析显示，当β-hCG浓度截断值为1.460 mIU/mL时，其预测妊娠的特异度达94.3%，灵敏度为42.6%，ROC 曲线下面积(AUC)为0.692。结论 囊胚培养液β-hCG水平与妊娠结局存在关联，具备快速临床诊断及一定的预测参考价值，可为无创评估囊胚发育潜能提供新方法，助力提升囊胚移植成功率。
芒果苷对纳米微塑料暴露所致小鼠心血管毒性的干预效应
施汶宁;昌德炜;徐淼;吕建国;孙燕玲;目的 探讨纳米微塑料（NPs）暴露致心血管毒性的剂量-效应关系及芒果苷（MGF）的干预效果。方法 将无特定病原体（SPF）级雄性Balb/c小鼠随机分为对照组，0.1、1、10、100mg/kg NPs组和100mg/kg NPs + 120mg/kgMGF组。各组通过连续灌胃给予相应药物28d，1次/d。末次给药后用无创尾套法检测小鼠收缩压（SBP）、舒张压（DBP）和平均动脉血压（MBP）；采用心脏超声测定左室射血分数（LVEF）、左室短轴缩短率（LVFS）和左室收缩末期内径（LVIDs）；苏木精-伊红（HE）和Masson染色观察主动脉和心肌组织病理学变化；采用荧光探针法检测活性氧（ROS）水平，微板法检测血清和心肌组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，酶联免疫吸附法（ELISA）检测白细胞介素6（IL-6）、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）水平。通过蛋白免疫印迹检测核因子E2相关因子2（Nrf2）、血红素氧合酶1（HO-1）、核因子-κB（NF-κB）和NOD样受体蛋白3（NLRP3）蛋白的表达。结果 与对照组相比，NPs各组呈现剂量依赖性心血管毒性，血压参数SBP、DBP、MBP明显升高（P<0.05）；心功能指标LVEF、LVFS下降且LVIDs增大（P<0.05）；形态学结果显示主动脉内膜部分脱落，中膜弹性纤维断裂且出现血管重构现象，心肌纤维排列紊乱，心脏和主动脉胶原纤维沉积增加（P<0.05）；血清和心肌组织中氧化应激指标ROS和MDA水平升高，SOD活性降低，炎症因子（IL-β、IL-6和TNF-α）水平升高，且呈剂量依赖性（P<0.05）。MGF干预后，上述指标均明显改善，血压和心功能恢复接近1mg/kgNPs组水平，氧化应激标志物和炎症因子水平降低，心脏和主动脉病理损伤减轻（P<0.05）；Nrf2和HO-1表达上升，NF-κB和NLRP3表达下降（P<0.05）。结论 NPs暴露可诱导小鼠产生剂量依赖性的心血管毒性，MGF干预可减轻该损伤，其作用可能与Nrf2/HO-1通路蛋白表达上调及NF-κB/NLRP3通路蛋白表达下调有关。
MAGED4过表达对肝细胞癌增殖、迁移及黏附功能的影响
张昇;张之碧;于晓庆;邹小琼;刘雨航;吕昊;李枫;王燕靖;罗彬;谢小薰;张庆梅;目的 探究黑色素瘤相关抗原D4（MAGED4）对肝细胞癌（HCC）恶性生物学行为的影响，为评估其作为HCC潜在治疗靶点提供实验依据。方法 利用LinkedOmics数据库筛选HCC中与MAGED4表达呈正相关的基因，并进行GO功能与KEGG通路富集分析。选取内源性MAGED4低表达的SMMC-7721、Huh7细胞，并以正常肝细胞LO2作为对照，通过慢病毒感染构建稳定过表达细胞株，并采用逆转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）与Western blot验证其过表达效率。通过CCK-8实验、流式细胞术、划痕愈合实验、Transwell迁移实验及细胞黏附实验，系统分析MAGED4过表达对细胞增殖、周期分布、迁移及黏附能力的影响。结果 生物信息学分析提示，MAGED4共表达基因显著富集于细胞间黏附、细胞外基质组织及PI3K-Akt信号通路等与肿瘤增殖和转移密切相关的生物学过程。成功构建MAGED4稳定过表达细胞模型。体外功能实验结果显示，MAGED4过表达组SMMC-7721和Huh7细胞呈间质样形态，而LO2细胞仍维持上皮样形态；与对照组相比，过表达组三株细胞的增殖活性（48 h: t=3.887、22.07、8.866，均P<0.05；72 h: t=3.231、23.84、9.848，均P<0.05；96 h: t=5.123、49.80、5.909，P<0.05、P<0.01、P<0.05）、划痕愈合率（12 h: F=40.90、44.00、200.50， 均P<0.001；24 h: F=112.00、34.89、249.20， 均P<0.001）及穿膜细胞数(F=239.20、 59.79、132.80， 均P<0.001)均升高，同时黏附细胞数显著降低（F=73.65、85.91、138.00， 均P<0.001），且细胞周期各时相分布无显著差异。结论 MAGED4可增强HCC和正常肝细胞增殖与迁移、抑制黏附，但仅诱导HCC细胞发生间质样形态改变，提示MAGED4能驱动HCC进展，有望成为HCC潜在的治疗靶点。
胃癌外泌体上调ABCG8促进肿瘤进展的机制
邵明凯;陈文通;王丽;徐有志;目的 探讨胃癌细胞MGC-803来源的外泌体通过上调ABCG8表达促进肿瘤发展的机制。方法 采用超高效液相色谱-串联质谱（UPLC-MS/MS）脂质组学技术，Western blot、实时定量PCR（qPCR）等方法，验证ABCG8在胃癌进程中的作用。引入胃癌细胞来源的外泌体（GC-Exo），开展一系列体外实验，评估其对胃正常黏膜上皮细胞GES-1中ABCG8表达及细胞增殖、迁移和克隆形成能力的影响。结果 UPLC-MS/MS脂质组学分析显示，细胞三酰甘油（TAG）在差异脂质中呈显著变化。qPCR和Western blot检测显示，与GES-1细胞组相比，GC-Exo处理组中ABCG8的mRNA和蛋白表达水平高于GES-1细胞组（P<0.05）；克隆形成实验及迁移实验结果显示，与GES-1细胞组比较，GC-Exo处理组克隆形成数多于GES-1细胞组（P<0.05），迁移细胞数多于GES-1细胞组（P<0.05）；细胞计数试剂盒-8（CCK-8）实验结果显示，GC-Exo处理组细胞增殖速率高于GES-1细胞组（F=26.43，P<0.001）。脂质组学分析显示，与GES-1细胞组相比，GC-Exo处理组中的TAG上调，伴随磷脂酰胆碱（PC）中PC(38:2e)降低。结论 胃癌细胞MGC-803来源的外泌体可能通过上调ABCG8表达介导胆固醇外排，从而触发GES-1细胞的促癌脂质代谢特征改变，促进肿瘤进展。
白头翁皂苷A下调LRP1抑制滑膜炎性细胞的增殖、迁移和侵袭
毛丽芳;陈天宇;王金虹;王浩;赵英杰;周仁鹏;胡伟;鲁超;目的 探究白头翁皂苷A（PSA）对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导的滑膜细胞异常增殖、迁移和侵袭的作用及机制。方法使用TNF-α诱导滑膜炎模型，并使用LRP1的抑制剂RAP和LRP1-siRNA构建LRP1沉默模型。采用不同浓度的PSA处理SW982滑膜细胞，CCK-8法检测细胞活力。Westernblot检测低密度脂蛋白受体相关蛋白1（LRP1）、基质金属蛋白酶3（MMP3）、神经钙黏蛋白（N-cadherin）的表达水平。EDU增殖染色试剂盒检测滑膜细胞的异常增殖能力。Transwell和划痕实验检测滑膜细胞迁移和侵袭的情况。逆转录实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测滑膜细胞LRP1、MMP3、N-cadherin、白细胞介素(IL)-1β、IL-6和TNF-α的mRNA表达水平。免疫荧光染色观察滑膜细胞迁移和侵袭相关蛋白MMP3、N-cadherin的表达情况。同时使用LRP1的抑制剂受体相关蛋白（RAP）验证MMP3、N-cadherin的表达。结果与TNF-α诱导的滑膜细胞炎症模型相比，PSA组SW982滑膜细胞活性降低(P<0.05)，MMP3、N-cadherin的表达降低(均P<0.01)；PSA组细胞在EdU染色后，阳性细胞比例减少(P<0.05）。此外，与正常滑膜细胞相比，TNF-α诱导的滑膜细胞炎症模型中LRP1的表达上升(P<0.01)，而加入PSA后LRP1的表达下调(P<0.05)。同时，与模型组相比，敲除LRP1后迁移侵袭相关蛋白MMP3、N-cadherin的表达降低(均P<0.01)。与模型组相比，PSA+RAP组滑膜细胞的MMP3、N-cadherin表达下降（均P<0.01)。结论PSA可以通过下调LRP1的表达抑制TNF-α诱导的滑膜异常增殖、迁移和侵袭。
基于双相收获法优化大鼠胸主动脉中膜来源间充质干细胞的分离培养体系
赖素玉;吴晶;池茗;王卓;曾译贤;王晓锋;目的 针对传统方法分离大鼠胸主动脉中膜间充质干细胞（MSCs）时存在的效率与纯度难以兼顾的局限，旨在建立并验证一种优化的双相收获法分离培养体系。方法 采用3月龄SD大鼠，无菌分离胸主动脉中膜并剪碎。实验设立3组，单纯酶消化法、预贴壁-酶消化序贯法及双相收获法组。系统比较3组在细胞首次迁出时间、原代融合时间、细胞获得率等生长动力学指标的差异。取第4代细胞，通过流式细胞术检测表面标志物（CD73、CD44、CD29、CD45、CD34、CD11b/c），并进行成骨、成脂及成软骨三系诱导分化实验以评估其干性。结果 双相收获法组原代融合时间（8.5±1.0）d短于单纯酶消化组（11.2±1.2）d和预贴壁-酶消化序贯组（12.8±1.5）d。流式鉴定显示，所获细胞稳定高表达CD73（87.2%±1.5%）、CD44（87.1%±0.8%）及CD29（96.8%±1.3%），低表达CD45（3.22%±0.20%）、CD34（2.46±0.5%）及CD11b/c（2.53%±2.1%）。经定向诱导，细胞可形成茜素红阳性钙结节、油红O阳性脂滴及阿利新蓝阳性糖胺聚糖，证实具备完整的三系分化潜能。细胞可稳定扩增至第8代，形态保持均一长梭形。结论 双相收获法是一种高效、稳定的大鼠胸主动脉中膜MSCs分离优化方案。该法通过时序性双步设计协同提升了细胞产量、纯度与干性，可为血管生物学与再生医学研究提供了优质的原位细胞来源。
卵圆孔未闭合并偏头痛与右向左分流及相关血液指标的关联研究
邵丽萍;金朝龙;李军;黄猛;目的 探究右向左分流及血液指标与偏头痛合并卵圆孔未闭(PFO)患者临床症状严重程度的相关性。方法 本研究前瞻性纳入189例偏头痛合并PFO患者及100名健康对照，经胸右心声学造影评估右向左分流程度，并依据视觉模拟量表评分分组。比较不同组患者头痛指标、血小板参数及5-羟色胺(5-HT)、环氧合酶-2(COX-2)水平，采用Spearman相关性分析及Jonckheere-Terpstra趋势检验、Logistic回归及受试者工作特征曲线分析分流程度与偏头痛严重程度的相关性及影响因素。结果 Spearman 相关检验及Jonckheere-Terpstra趋势检验显示，右向左分级与偏头痛严重程度评分显著相关(rs=0.885，P<0.001)，各项头痛指标随分流加重呈递增趋势(均P<0.001)。多因素Logistic回归分析表明，5-HT降低，血小板计数(PLT)、平均血小板体积(MPV)、COX-2升高是其独立危险因素。ROC曲线分析显示，5-HT、PLT、MPV、COX-2单项指标(AUC分别为0.79、0.91、0.76、0.78)及联合模型(AUC：0.96)均具有诊断价值；经DeLong检验，联合模型的AUC显著优于各单项指标(均P<0.001)，联合模型预测效能最佳(敏感度87.06%，特异性91.35%)。结论 PFO右向左分流程度加重与偏头痛临床症状及功能损害程度相关，5-HT、PLT、MPV、COX-2等指标变化与疾病严重程度显著关联，联合检测可提升诊断效能，为临床评估与治疗提供参考。