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DAZAP2在乳腺癌中的表达及其生物学功能
徐道军;王子明;吴正升;目的 探讨无精子症缺失基因相关蛋白2（DAZAP2）在乳腺癌中的表达及其对肿瘤生物学行为的影响。方法 通过TCGA数据库分析DAZAP2的表达水平与患者生存之间的关系。采用免疫组化方法检测DAZAP2在乳腺癌和癌旁组织中的表达水平并分析其与临床病理特征的关系，使用Kaplan-Meier对不同DAZAP2表达水平患者的总生存期（OS）及无复发生存期（RFS）进行分析。分别构建敲低和过表达DAZAP2的乳腺癌稳转细胞系，通过CCK-8与克隆形成实验评估乳腺癌细胞增殖能力的变化，通过细胞划痕和Transwell实验评估乳腺癌细胞迁移和侵袭能力的变化。结果 生物信息学分析和免疫组化结果显示，DAZAP2在乳腺癌组织中的表达水平低于癌旁组织（P＜0.001），且其蛋白表达水平与患者的组织学分级和淋巴结转移呈负相关（P＜0.05）。Kaplan-Meier生存分析结果显示，DAZAP2低表达与乳腺癌患者不良预后相关（P＜0.05）。CCK-8实验显示，与sh-Ctrl组相比，sh-DAZAP2-1组和sh-DAZAP2-2组乳腺癌细胞增殖活性升高（F＝52.38，P＜0.001）；与Flag组相比，Flag-DAZAP2组细胞增殖活性降低（F＝41.67，P＜0.001）。克隆形成实验显示，与sh-Ctrl组相比，sh-DAZAP2-1组和sh-DAZAP2-2组克隆形成数增加（F＝12.74，P＜0.01）；与Flag组相比，Flag-DAZAP2组克隆形成数减少（t＝9.86，P＜0.001）。细胞划痕实验显示，与sh-Ctrl组相比，sh-DAZAP2-1组和sh-DAZAP2-2组划痕愈合率升高（F＝18.23，P＜0.01）；与Flag组相比，Flag-DAZAP2组划痕愈合率降低（t＝10.42，P＜0.001）。Transwell实验显示，与sh-Ctrl组相比，sh-DAZAP2-1组和sh-DAZAP2-2组细胞迁移及侵袭数量均增加（F＝55.16、68.42，均P＜0.001）；与Flag组相比，Flag-DAZAP2组细胞迁移及侵袭数量均减少（t＝6.18、5.73，均P＜0.01）。结论 DAZAP2高表达可通过抑制乳腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力，延缓乳腺癌细胞的恶性进展。
结直肠癌耐药细胞诱导肝星状细胞活化对肿瘤肝转移的影响
路畅;袁路云;王海静;目的 探讨结直肠癌耐药细胞诱导肝星状细胞（HSCs）活化对结直肠癌肝转移的影响及机制。方法 通过Western blot和qPCR检测结直肠癌敏感细胞（HCT116）与耐药细胞（HCT116/OXA）中RUNX1的表达差异；将2种细胞的条件培养基（CM）分别与HSCs共培养，检测HSCs活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（COL1A1）的表达及细胞形态变化；通过Transwell实验和划痕实验观察活化HSCs对结直肠癌细胞HCT116迁移和侵袭能力的影响；利用RUNX1抑制剂Ro5-3335预处理耐药细胞后，检测HSCs活化水平及HSCs活化对结直肠癌肝转移的影响。结果 Western blot和qPCR结果显示，结直肠癌耐药细胞HCT116/OXA中的RUNX1蛋白及mRNA表达水平高于敏感细胞（P＜0.01）；对于LX-2细胞，CM(HCT116/OXA)组相比于CM(HCT116)组呈现出更明显的梭形样形态改变，且HSCs中α-SMA和COL1A1的表达水平更高（P＜0.01，P＜0.05）；与对照组相比，经活化的HSCs的CM处理后，结直肠癌细胞的迁移及侵袭细胞数增加（P＜0.05）；经RUNX1抑制剂处理后，相应HSCs的CM使结直肠癌细胞迁移和侵袭的细胞数减少（P＜0.05）。结论 结直肠癌耐药细胞可通过RUNX1诱导HSCs活化，进而促进结直肠癌肝转移，RUNX1可能成为结直肠癌肝转移治疗的潜在靶点。
315例儿童Wilson病血脂异常特征及危险因素分析
徐芸芸;花代平;葛淑凡;宣巧玉;孙兰婷;杨文明;汪瀚;目的 分析儿童Wilson病（WD）患者的血脂特点及相关危险因素。方法回顾性收集315例儿童WD患者及248例健康体检儿童的临床资料，对比分析两组血脂水平的差异；根据血脂水平将WD组分为血脂正常组（85例）和血脂异常组（230例），比较两组一般资料与生化指标，采用多因素Logistic回归分析血脂异常的独立危险因素。结果儿童WD患者血脂异常发生率为73.0%（230/315），其中高三酰甘油血症77例（33.5%）、高胆固醇血症11例（4.8%）、混合性高脂血症104例（45.2%）、高脂蛋白a血症9例（3.9%）、低高密度脂蛋白胆固醇血症29例（12.6%）。不同血脂异常类型在年龄分布上差异有统计学意义（P<0.05），在性别分布上差异无统计学意义。与血脂正常组相比，血脂异常组的同型半胱氨酸、超氧化物歧化酶（SOD）、血小板计数（PLT）、纤维蛋白原、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶、γ-谷氨酰转移酶、尿酸、胱抑素C（Cys-C）、Ⅳ型胶原（C-Ⅳ）、层粘连蛋白水平均升高（均P<0.05）。多因素Logistic回归显示，C-Ⅳ（OR=5.037，95%CI:2.562～9.900）、PLT（OR=2.297，95%CI:1.580～3.339）、Cys-C（OR =2.008，95%CI:1.395～2.890）和SOD（OR =1.996，95%CI:1.342～2.970），均为儿童WD血脂异常的独立危险因素。结论 儿童WD患者血脂异常发生率高，以混合性高脂血症和高三酰甘油血症为主，C-Ⅳ、PLT、Cys-C、SOD是儿童WD患者血脂异常的独立危险因素。
肉苁蓉总苷通过Nrf2/HO-1通路对帕金森病小鼠的保护作用及其机制
胥志鹏;王兴宇;姚树青;张家怡;徐超然;刘丰彦;霍东升;目的 探究肉苁蓉总苷（GCs）对1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶（MPTP）诱导的帕金森病（PD）模型小鼠的神经保护作用及其可能机制。方法 将40只小鼠随机分为空白（Control）组、PD组、GCs组和左旋多巴（L-DOPA）组，每组10只。Control组腹腔注射给予生理盐水，其余各组腹腔注射MPTP（30 mg/kg），1次/d，连续5 d；造模结束后，Control组和PD组灌胃给予生理盐水，GCs组和L-DOPA组分别给予100 mg/kg和50 mg/kg剂量灌胃，1次/d，连续28 d。采用旷场实验和转棒实验评估运动功能；免疫组织化学法检测中脑黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性神经元数量；透射电镜观察黑质线粒体超微结构；生化法检测黑质组织中谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）及活性氧（ROS）水平；Western blot法检测黑质组织中TH、核因子E2相关因子2（Nrf2）、Kelch样ECH相关蛋白1（Keap-1）及血红素加氧酶1（HO-1）的蛋白表达情况。结果 与Control组相比，PD组小鼠运动功能下降（P＜0.01），黑质T-SOD活性降低（P＜0.01），TH阳性神经元数量、GSH含量减少（P＜0.01），MDA、ROS含量增多（P＜0.01）；与PD组相比，GCs组小鼠运动功能改善（P＜0.05），T-SOD活性升高（P＜0.05），黑质TH阳性神经元数量、GSH含量增多（P＜0.05），MDA、ROS含量减少（P＜0.05）。Control组黑质线粒体形态结构正常，未见明显膜结构模糊及空泡样改变；PD组线粒体肿胀、嵴结构紊乱及空泡样改变；GCs组线粒体肿胀、嵴结构紊乱及空泡样改变有所减轻。与Control组相比，PD组TH、Nrf2和HO-1蛋白水平均下降（P＜0.01），Keap-1蛋白水平上调（P＜0.01）；与PD组相比，GCs组TH、Nrf2和HO-1蛋白水平均上调（P＜0.05），Keap-1蛋白水平下降（P＜0.05）。结论 GCs可改善MPTP诱导的PD模型小鼠运动功能障碍，减轻多巴胺能神经元及线粒体损伤，其作用可能与调节Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白表达、增强抗氧化能力及减轻氧化应激有关。
不同抗血小板治疗方案对脑小血管病患者的认知功能及脑影像标志物的影响
王志鑫;王月华;秦佳佳;宋笑涵;周霞;朱小群;目的 探讨脑小血管病（CSVD）患者预防性应用不同抗血小板药物治疗方案（阿司匹林与氯吡格雷及其具体剂量）对其认知功能、血液指标及脑影像学标志物的影响。方法 采用随机对照研究方法，纳入160例CSVD患者，随机分为：阿司匹林组（ASA组）、氯吡格雷低量组（CLOP-50组）、氯吡格雷常量组（CLOP-75组）及对照组（HC组）。各在基线及治疗6个月时评估认知功能[听觉词语学习测试即刻（AVLT-IR）、听觉词语学习测试短延迟回忆（AVLT-SDR）、听觉词语学习测试长延迟回忆（AVLT-LDR）、汉密尔顿焦虑量表（HAMA）及汉密尔顿抑郁量表（HAMD）、日常生活能力量表（ADL）、痴呆筛查量表（AD8）等]、血液指标[血小板计数（PLT）和平均血小板体积（MPV）等]及CSVD相关影像标志物[脑白质高信号（WMH）、脑微出血（CMB）]的变化。结果 治疗6个月后，组内比较显示，与基线水平相比，ASA组患者的AVLT即刻（AVLT-IR）、短延迟回忆（AVLT-SDR）及长延迟回忆（AVLT-LDR）得分均升高（P<0.05）；CLOP-75组患者HAMA及HAMD得分均降低（P<0.05），且其AVLT-LDR得分亦升高（P<0.05）；ASA组与CLOP-75组的CMB个数均较基线增加（P<0.05），但两组在血液指标方面与基线相比差异无统计学意义。与基线水平相比，CLOP-50组及HC组在认知功能、血液指标及CSVD相关影像学标志物方面变化差异均无统计学意义（P>0.05）。各组间比较显示，ASA组AVLT-LDR评分及CMB数量的升高速度均快于HC组（β=0.187， P=0.048；β=-0.695， P=0.007），且ASA组CMB增加速度亦快于CLOP-50组（β=-0.695， P=0.007）。HC组ADL评分的升高速度快于ASA组（β=0.170， P=0.022）。CLOP-75组AD8评分的下降速度快于HC组（β=-0.128， P=0.047），但其CMB增加速度也快于HC组（β=0.604， P=0.047）。结论 在CSVD患者中，阿司匹林100 mg或氯吡格雷75 mg虽可改善认知功能，但会增加脑出血风险；而氯吡格雷50 mg短期未见临床获益及影像学改善。
小鼠OTUD6B敲降腺相关病毒在肝脏糖代谢中的作用
时玉男;王凯;檀廷超;王响;刘东明;王秀云;目的 研究小鼠去泛素化酶卵巢肿瘤结构域6B（OTUD6B）的肝脏特异性敲降重组腺相关病毒（AAV）甲状腺素结合球蛋白（TBG）（AAV-TBG-shOTUD6B)在C57BL/6J小鼠肝脏中的敲降效率及其对肝脏糖代谢的调控作用。方法 设计并验证有效的siOTUD6B的序列，将非特异性干扰RNA阴性对照（shNC)和shOTUD6B的DNA序列插入含有启动子TBG的AAV载体骨架，构建并纯化得到AAV-TBG-shNC和AAV-TBG-shOTUD6B病毒。将AAV-TBG-shNC和AAV-TBG-shOTUD6B经尾静脉注射靶向小鼠肝脏，高脂饮食（HFD）喂养8周后检测小鼠OTUD6B蛋白和mRNA水平以及血糖水平、葡萄糖耐量、胰岛素敏感性、磷酸化蛋白激酶B（p-AKT)和磷酸化糖原合成酶激酶-3β（p-GSK-3β）蛋白表达水平。结果 与AAV-TBG-shNC组相比，AAV-TBG-shOTUD6B组小鼠肝脏OTUD6B蛋白水平下降，小鼠肝脏OTUD6B mRNA水平下降（P <0.01）、小鼠禁食4 h血糖水平和禁食16 h血糖水平均降低（P <0.05，P <0.01）、小鼠肝脏p-GSK-3β蛋白水平降低（P <0.05），葡萄糖耐量增强（P <0.05）、胰岛素敏感性增强（P <0.01）、小鼠肝脏p-AKT水平升高（P <0.05）。结论 OTUD6B在影响肝脏糖代谢稳态中发挥重要作用，肝脏特异性敲降OTUD6B可改善HFD诱导的小鼠血糖水平，增强胰岛素敏感性。研究为T2DM的治疗提供新的理论依据。
机械压力对不同部位硬脑膜细胞迁移及促成骨能力的影响
张海东;申杰;高雅洁;邵国;张春阳;赵志军;目的 探究机械压力调控对颅缝硬脑膜细胞（S-DCs）与非颅缝硬脑膜细胞（NS-DCs）迁移、促成骨能力的影响。方法 分离培养5日龄SD大鼠硬脑膜细胞（S-DCs）、非颅缝硬脑膜细胞（NS-DCs）及颅缝间充质干细胞（CS-MSCs）。根据细胞来源及是否施加机械压力（1.07 kPa、24 h）设置S-DCs-Normal、S-DCs-Stress、NS-DCs-Normal、NS-DCs-Stress四种实验条件。采用细胞划痕试验检测硬脑膜细胞迁移能力；收集四种实验条件培养基与CS-MSCs共培养并进行成骨诱导。采用茜素红染色检测钙盐沉积，Western blot检测成骨相关蛋白表达。结果 与Normal组相比，Stress处理后S-DCs和NS-DCs的迁移能力均降低（P<0.05）。与S-DCs相比，NS-DCs在相同处理条件下迁移能力较弱（P < 0.05）。条件培养基实验显示，Stress处理后CS-MSCs的成骨能力降低（P<0.05），且NS-DCs来源条件培养基的促成骨作用弱于S-DCs（P<0.05）。Western blot结果与茜素红染色趋势一致，Stress处理及NS-DCs来源均可下调成骨相关蛋白表达（P<0.05）。结论 机械压力可显著抑制硬脑膜细胞迁移及其介导的CS-MSCs成骨分化进程。S-DCs的力学耐受性与成骨调控能力显著优于NS-DCs。
大黄素促牙髓细胞成牙本质向分化与CD44/ERK的相关性
张晓蕾;李午丽;王元银;目的 探讨大黄素在脂多糖(LPS)诱导的人牙髓细胞(HDPCs)成牙本质向分化中的作用。方法 分离培养HDPCs，不同浓度的LPS、大黄素预处理HDPCs，Western blot检测细胞中成牙本质向分化相关基因ALP、RUNX2、DMP-1、DSPP的蛋白表达水平；生物信息学、小干扰RNA (si-RNA) 转染技术，分析并验证大黄素的下游细胞信号通路及作用靶点。结果 与LPS组相比，大黄素组ALP、RUNX2、DMP-1、DSPP的蛋白表达水平上升(P<0.05)；GO和KEGG富集分析显示，MAPK信号通路富集最显著；Western blot结果显示，与OIM+LPS组相比，OIM+LPS+Emodin组的p-ERK/ERK表达量上升(P<0.05)。生物信息学筛选出与大黄素在炎症环境下促进HDPCs成牙本质分化相关的前10个核心基因，包括CD44、ITGB2、SP1、TLR2、CCL2、CCL5、ITGAX、CD86、ICAM1、SYK。RT-qPCR结果显示，与CON组相比，OIM组CD44基因的mRNA表达量上升(P<0.01)。敲低CD44表达后，与si-NC组相比，si-CD44组ALP、RUNX2、DMP-1、DSPP的蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论 大黄素可显著促进LPS诱导的人牙髓细胞成牙本质向分化，其调控作用与上调CD44表达、激活ERK信号通路密切相关。
仿生超疏水牙科修复树脂材料的构建及其性能研究
杨玉瑾;郑顺丽;目的 评价仿生超疏水牙科修复树脂材料(BSDRM)的表面性能、力学性能、生物相容性及抑制蛋白/细菌粘附能力。方法 通过对纳米ZrO2进行氟硅烷(FAS)修饰得到FAS-ZrO2，将其与纳米SiO2共同引入由双酚-A双甲基丙烯酸缩水甘油酯(Bis-GMA)、三乙二醇二甲基丙烯酸酯(TEGDMA)、全氟烷基丙烯酸酯(FMA)及光引发体系构成的树脂基体中，制备BSDRM。采用FTIR、XPS、FE-SEM、AFM表征材料化学结构与表面形貌，测定水接触角、滚动角、表面能等润湿性参数，评价维氏硬度、径向拉伸强度及压缩强度等力学性能。通过CCK-8法与细胞染色评价生物相容性，以黏蛋白吸附实验和变形链球菌黏附实验分别评估其抑制蛋白吸附与细菌黏附的性能。结果傅里叶变换红外光谱(FTIR)与X射线光电子能谱(XPS)证实FAS成功接枝于ZrO2表面；BSDRM表面呈现微-纳米复合粗糙结构，水接触角达152.97°±1.64°，滚动角低至7.37°±1.91°，表面能仅为(1.20±0.26)mN/m。力学测试显示，BSDRM硬度显著高于亲水树脂修复材料与商用窝沟封闭剂(P<0.001)，压缩强度与窝沟封闭剂无显著差异。CCK-8与细胞染色结果显示，BSDRM对L929细胞无细胞毒性，且细胞形态完整。抑制蛋白吸附实验中，BSDRM表面的黏蛋白吸附量最低(P<0.001)；抑制细菌粘附的实验中，BSDRM表面变形链球菌黏附量显著少于对照组(P<0.01)。结论 成功构建了BSDRM，该材料兼具优异的超疏水性能、良好的力学性能、生物相容性及显著的抑制蛋白吸附与细菌粘附能力，有望通过抑制菌斑形成降低龋病发生风险，为龋病防治提供新材料策略。
PADI4负向调控中性粒细胞MMP-14/17/25表达在系统性红斑狼疮中的机制
罗颖;汪晓庆;马洁;周强;目的 探究肽基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）对基质金属蛋白酶（MMPs）表达的调控机制及其在系统性红斑狼疮（SLE）发展中的潜在作用。方法 采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-qPCR）检测SLE患者与健康对照（HC）组MMP-14/17/25的mRNA表达水平，应用酶联免疫吸附实验（ELISA）测定其血清蛋白水平。Spearman秩相关分析评价MMPs水平与SLE患者临床指标的相关性。利用PADI4抑制剂GSK484处理原代中性粒细胞，或在PADI4敲减的中性粒细胞样HL-60细胞（dHL-60）中检测MMPs表达水平变化，并通过细胞划痕实验评估细胞迁移能力。结果 SLE患者中性粒细胞MMP-14/17/25的mRNA表达低于HC组（均P<0.01）。血清MMP-14/17/25表达低于HC组（均P<0.01）。MMP-14水平与免疫球蛋白G（IgG）（r=-0.266）、免疫球蛋白A（IgA）（r=-0.286）、球蛋白（GLB）（r=-0.269）呈负相关（均P<0.05），MMP-17水平（r=-0.269）及MMP-25水平（r=-0.244）与尿蛋白（UTP）均呈负相关（均P<0.05）。GSK484（10 μmol/L）抑制PADI4活性后，与对照组相比，中性粒细胞MMP-14/17/25蛋白表达水平上调（均P<0.05），同时细胞划痕迁移率增加（P<0.01）。敲减PADI4表达后，MMP-14/17/25 mRNA表达水平较对照组上调（均P<0.05）。结论 MMP-14/17/25在SLE患者中性粒细胞和血清中低表达，受PADI4负向调控。PADI4可能通过抑制MMPs表达削弱细胞迁移功能，进而参与SLE疾病发展。MMPs或可作为SLE病情监测及靶向干预的潜在新靶点。