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萝卜硫素通过调节ALOX5/NF-κB信号通路调控巨噬细胞糖酵解抑制糖尿病肾病进展
乌日娜;丁海东;常宏;孙娜娜;张磊;目的 探讨萝卜硫素(SFN)调节花生四烯酸5-脂氧合酶基因(arachidonic acid 5-lipoxygenase,ALOX5)/核因子kappa B(NF-κB)信号通路调节巨噬细胞糖酵解对糖尿病肾病(DN)进展的影响。方法 生物信息学分析SFN治疗DN的靶基因。使用30 mmol/L高葡萄糖(HG)处理人近端肾小管上皮细胞系(HK-2细胞)诱导体外DN模型。将HK-2细胞分为如下组：正常糖(NG)组、HG组、HG+SFN(3 mmol/L)组、HG+ALOX5组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5组、HG处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组、HG+SFN(3 mmol/L)+ALOX5转染处理的巨噬细胞+HK-2细胞组。CCK-8检测细胞活力，原位末端脱氧核苷酸转移酶标记(TUNEL)法检测细胞凋亡；葡萄糖和乳酸试剂盒检测各组细胞中葡萄糖和乳酸水平；Western blot检测各组细胞中ALOX5、NF-κB以及糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达；使用链脲佐菌素(STZ)构建DN小鼠模型，DN小鼠给与SFN(0.5mg/kg)治疗；检测小鼠各项生化指标，HE染色检测肾组织病理变化；Westernblot检测小鼠肾脏巨噬细胞中糖酵解相关蛋白己糖激酶-2(HK2)、丙酮酸激酶M2(PKM2)、葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)的表达。结果 生物信息学分析结果显示ALOX5是SFN治疗DN的靶基因。与HG组相比，SFN处理增强HK-2细胞活力并抑制细胞凋亡（P<0.05）；同时，SFN处理抑制HG诱导的巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达，减弱巨噬细胞介导的HK-2细胞损伤（P<0.05）;Westernblot结果表明SFN抑制ALOX5和NF-κB的表达（P<0.05）；小鼠实验结果显示，SFN治疗改善DN小鼠肾功能和肾组织病理学改变，抑制肾组织中巨噬细胞糖酵解相关蛋白的表达（P<0.05）。结论SFN通过抑制ALOX5/NF-κB信号通路抑制巨噬细胞糖酵解从而改善DN进展。
不同胃癌筛查方案在早期胃癌诊断中的应用价值
张朋悦;朱振;许婷婷;冯慧;李杨;蔡轶;何佳慧;王亚雷;目的 比较《中国早期胃癌筛查流程专家共识意见(2017年，上海)》中提出的流行病学调查、新型胃癌筛查评分系统和《京都胃炎分类》提出的胃癌风险内镜评分三种筛查方案的检验效能，验证不同方案对早期胃癌患者风险评估的准确性。方法 纳入行早期胃癌内镜黏膜下剥离术并经病理证实的患者为胃癌组，连续纳入同期非胃癌患者为对照组，入组患者行问卷调查及血清学检测，胃镜检查过程中按照京都胃炎分类记录内镜下表现。评估不同筛查方案各危险分层胃癌患者比例，绘制不同方案单独诊断及联合诊断胃癌的受试者工作曲线(ROC),使用ROC曲线下面积评估不同方案检验效能。结果 共纳入研究对象204例，其中胃癌患者84例，非胃癌120例，三种筛查方案中，京都胃癌风险内镜评分诊断价值最高(AUC=0.79),其灵敏度和特异度分别为72.6%和79.1%,不同方案联合诊断未明显提高早期胃癌检验效能；在新型胃癌评分系统划定的中高危人群中，京都胃癌风险内镜评分更有鉴别价值。结论 京都胃癌风险内镜评分在早期胃癌诊断中有较高临床价值，可与新型胃癌筛查评分系统联合用于早期胃癌风险评估。
血清HSP90α和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及预后价值
董晓玉;钟涛;叶元滋;郑美娟;沈继龙;目的 探讨肺癌患者血清热休克蛋白90α(HSP90α)和癌组织基因HSP90AA1在肺癌中的高表达及其预后价值。方法 收集109例肺癌患者为实验组；36例肺部炎症患者为参照组；以及30例健康体检者为对照组，比较三组间血清HSP90α水平的差异；分析HSP90α与临床参数的关系；从癌症基因图谱(TCGA)数据库下载数据分析HSP90AA1在癌组织中的表达，同时探讨HSP90AA1与患者临床病理资料的相关性及对预后的影响。结果 实验组血清HSP90α水平高于参照组和对照组(P<0.05);HSP90α诊断肺癌的ROC曲线下面积是0.898(P<0.05);肺鳞癌组、小细胞癌组HSP90α表达高于腺癌组(P<0.05);肺癌患者治疗缓解期HSP90α表达降低，病情进展期HSP90α表达显著升高(P<0.05);TCGA数据分析显示HSP90AA1表达癌组织高于癌旁组织，且肺鳞癌癌组织HSP90AA1表达高于肺腺癌(P<0.05);HSP90AA1表达与肺癌患者的年龄、性别、临床分期、肿瘤残余均无关；K-M生存分析单因素、多因素Cox回归分析显示HSP90AA1高表达降低肺癌患者的整体生存率(OS),HSP90AA1表达水平是肺癌患者的独立预后因素。结论 肺癌患者血清HSP90α及癌组织HSP90AA1水平升高，癌组织高表达HSP90AA1是患者的独立预后因素；HSP90α和HSP90AA1可作为肺癌的一种辅助诊断指标；其表达水平对肺癌患者疗效观察及生存状态预测具有临床应用价值。
石斛碱通过上调HSP90AA1调节免疫细胞干预糖尿病肾病
姜运会;唐传铁;李军;张楠楠;目的 运用网络药理学、生物信息学和Western blot探究石斛碱通过干预免疫治疗糖尿病肾病的作用机制。方法 通过Pharmmaper、Superpred等数据库筛选石斛碱的靶点，从GeneCards、OMIM等数据库筛选糖尿病肾病的疾病靶点，在Immport、InnateDB等数据库中检索免疫相关靶点，韦恩图获取上述三者之间的交集；STRING软件结合Cytoscape软件构建交集靶点的PPI图，使用CytoHubba插件挖掘互作网络中的核心靶点；从GEO获取数据集GSE142025,使用R语言CIBERSORT包进行免疫浸润和WGCNA分析；使用GSE1009、GSE30122和GSE142025进行基因差异表达分析和ROC验证，将关键靶点与免疫细胞表型进行相关性分析，并进行分子对接和分子动力学模拟分析；使用HK-2细胞进行Western blot实验检测HSP90AA1的表达。结果 共得到HSP90AA1、LCK、EGFR等128个交集基因，核心靶点涉及HSP90AA1、LCK和STAT3;分子对接及分子动力学模拟分析显示HSP90AA1的蛋白可以与石斛碱进行良好的结合；Western blot实验表明：与对照组相比，高糖组中HSP90AA1显著下调；与高糖组相比，给药组中HSP90AA1显著上调。结论 石斛碱可以通过调节HSP90AA1的表达从而干预糖尿病肾病。
内隐社会认知研究发展述评
谭汉超;汪凯;内隐社会认知兴起于20世纪末期,经过近十年的发展逐渐成熟,成为现今社会认知研究中的一个热点。研究主要从社会认知无意识成分的角度,对自尊、态度、刻板印象等传统社会认知成分开展进一步的探索。针对内隐社会认知的理论体系及其研究内容进行综述,并探讨了内隐社会认知研究中使用的"内隐测验"与传统社会认知研究中使用的"外显测验"之间的区别,再从原理和应用两个方面对内隐社会认知的主要研究方法——内隐联想测验进行了介绍,最后对进一步开展内隐社会认知的研究进行展望。
荧光共振能量转移(FRET)体系的构建及其验证
钱月娇;冯钰斌;钱学文;朱传君;李鸽;卢多;陈飞虎;目的构建携带FRET体系(YFP-CFP对)的一组原核表达工程质粒,在大肠杆菌(E. coli)中高效表达后,验证该体系FRET信号作为细胞内监测蛋白相互作用指标的可行性。方法分别构建N端、C端以及两端分别编码YFP和(或) CFP的6个原核表达工程质粒:pNYFP、pCYFP、pNCFP、pCCFP、pYFP-CFP、pCFP-YFP。设计YFP-CFP和CFP-YFP作为阳性对照,而等量的YFP与CFP混合的体系(YFP+CFP)作为阴性对照。将过表达的工程蛋白通过镍柱、分子筛层析柱进行初步纯化后使用酶标仪检测相同摩尔浓度纯化蛋白的FRET信号。在此基础上,进一步用酶标仪检测表达工程蛋白的菌液中的FRET信号。结果通过测序验证,成功构建了6个原核表达的工程质粒。酶标仪检测的结果显示在体外纯化蛋白条件和菌液条件下均可产生明确的FRET信号。结论成功构建了FRET体系的原核表达工程质粒,不仅验证了蛋白条件下的可行性,而且验证了菌液条件下的可行性,为在活细胞条件下对蛋白-蛋白相互作用进行实时的动态研究,提供一个非常便利的实验方法。
黄芪多糖调控乳腺癌细胞来源的外泌体及其对巨噬细胞极化和抗肿瘤效应的影响
关晨娟;解彩霞;郑晓娇;包娜娜;王露;白文慧;乔姝;张浩楠;目的 探讨黄芪多糖(APS)调控乳腺癌来源的外泌体中miR-107和miR-346介导的巨噬细胞极化对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及机制。方法 选取8周龄雌性BALB/c小鼠40只，分别构建乳腺癌异种移植瘤模型和4T1移植肿瘤模型。分为对照组和APS组，APS组裸鼠每日APS灌胃治疗共25 d,对照组裸鼠分别给予等量的生理盐水，在完成所有治疗后，对裸鼠实施安乐死，分离肿瘤组织。采用Western blot和流式细胞术检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67、CD206、CD163、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和CD86的表达，分析肿瘤组织中单细胞悬液的凋亡情况。人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞培养并使用APS刺激，收集细胞培养基外泌体，采用CCK-8法、划痕法、透孔室细胞侵袭实验、qRT-PCR检测细胞的增殖、迁移和侵袭情况。生物信息学筛选差异基因。结果 通过测定与乳腺癌细胞增殖和转移相关的分子表达，显示APS治疗降低了MDA-MB-231异种移植瘤组织中增殖相关蛋白(PCNA和Ki-67)和转移相关蛋白(波形蛋白)的表达；并观察到肿瘤相关巨噬细胞的极化情况，APS处理4T1移植肿瘤组织可降低M2巨噬细胞的数量，增加M1巨噬细胞的数量，致使M2/M1巨噬细胞数量的比例降低，增加了4T1移植肿瘤组织的细胞凋亡。且相关蛋白的表达情况是iNOS和CD86增加，CD206和CD163降低。MDA-MB-231产生的外泌体经APS处理降低了M2巨噬细胞的极化，并且影响miR-107和miR-346表达。结论 APS通过调节乳腺癌细胞来源的外泌体中miR-107或miR-346的表达来抑制M2巨噬细胞极化，最终抑制乳腺癌细胞的增殖和转移。
肿瘤相关巨噬细胞在肝癌中的作用及靶向治疗研究进展
吴婧婧;孙妩弋;魏伟;肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤微环境中浸润的一种重要的免疫细胞。在不同的刺激因素作用下,可以向经典激活型巨噬细胞(M1型)或选择性激活型巨噬细胞(M2型)极化。TAM主要具有M2型巨噬细胞表型,在肝癌的生长及转移中发挥重要作用。本文就TAM在促进肝癌血管生成、浸润转移等过程的相关分子机制及靶向治疗肝癌的研究进展作一综述。
肝硬化合并食管胃底静脉曲张患者发生破裂出血的危险因素分析
白雪;刘晓艳;杜文军;张忠法;目的 探究肝硬化合并食管胃底静脉曲张(EGV)患者发生破裂出血的相关危险因素。方法 纳入309名EGV患者，根据其住院期间是否发生EGV破裂出血，分为出血组(n=62)和非出血组(n=247),收集患者的一般特征、实验室及影像学资料并进行统计分析。连续变量应用Mann-Whitney U检验或t检验，分类变量应用χ2分析探究组间差异，应用二元Logistic回归探究EGV破裂出血的危险因素并构建预测模型。将上述患者按照7∶3分为建模组及验证组，应用bootstrap法进行内部验证，应用ROC曲线对两组模型效能予以检验。结果 高密度脂蛋白(HDL)(P<0.001,OR=0.131,95%CI=0.049～0.350)、C-反应蛋白(CRP)(P=0.010,OR=2.657,95%CI=1.269～5.563)、门静脉宽度(PVW)(P=0.050,OR=1.156,95%CI=1.000～1.336)、脾脏厚度(P=0.035,OR=1.492,95%CI=1.028～2.165)、Child-Pugh B级(P=0.003,OR=11.320,95%CI=2.232～57.407)及Child-Pugh C级(P=0.002,OR=3.888,95%CI=1.659～9.114)与EGV破裂出血相关，ROC曲线示建模组集预测模型的AUC值为0.802,验证组为0.836。结论 CRP升高、Child-Pugh B级和C级、HDL降低、门静脉增宽和脾脏增厚是EGV患者发生破裂出血的危险因素。
艾司氯胺酮对小鼠焦虑抑郁的影响及其机制
周静文;李元海;邱高林;蔡雯;赵园园;夏晓琼;目的 探讨艾司氯胺酮对小鼠焦虑抑郁样行为的影响及其与炎症的关系。方法 SPF级健康成年雄性c57BL/6J小鼠，20～24 g/只，采用随机数字表法分成5组(n=8):对照(Con)组、艾司氯胺酮(ESK)组、模型(LPS)组、模型+艾司氯胺酮预防(LPS+ESK1)组、模型+艾司氯胺酮治疗(LPS+ESK2)组。用腹腔注射LPS 0.83 mg/kg的方法 制备炎症诱导的焦虑抑郁模型。ESK组注射艾司氯胺酮10 mg/kg; LPS组注射LPS;LPS+ESK1组在注射LPS前24 h,注射艾司氯胺酮10 mg/kg; LPS+ESK2组注射LPS,30 min后注射艾司氯胺酮10 mg/kg。于腹腔注射LPS 24 h后，采用行为学实验测定小鼠的焦虑抑郁样行为。行为学实验结束，取脾立即称重；取海马组织，采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6的含量，苏木精-伊红(HE)染色观察海马中神经元的病理变化。结果 与Con组比较，LPS组小鼠焦虑抑郁样行为增加(P<0.05),脾质量/体质量增加(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6浓度升高(P<0.05),神经元变性坏死增多；ESK组上述指标的差异无统计学意义。与LPS组比较，LPS+ESK1组、LPS+ESK2组小鼠的焦虑抑郁样行为减少(P<0.05),脾质量/体质量减轻(P<0.05),IL-1β、TNF-α、IL-6浓度降低(P<0.05),神经元变性坏死减少。与LPS+ESK1组比较，LPS+ESK2组旷场实验中心区域移动距离和高架十字迷宫实验进入开臂的距离增加(P<0.05),IL-6及TNF-α浓度降低(P<0.05),神经元损伤程度减轻。结论 艾司氯胺酮能够改善LPS诱导的小鼠焦虑抑郁样行为和海马神经元的损伤，其机制可能与炎症反应减轻有关。