目的 在多孔钛表面构建表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与聚赖氨酸(PLL)酚胺交联涂层整合抗菌物质氯己定(CHX),评价涂层的抗菌性能和生物安全性。方法 将纯钛进行碱热预处理制成多孔钛(pTi组),然后在碱性有氧环境下浸没于EGCG与PLL混合溶液中24 h,从而沉积酚胺交联涂层(EP组),再将其进一步浸没于CHX溶液中24 h,使之与CHX整合(EPC组)。用扫描电镜(SEM)、X射线光电子能谱仪(XPS)和水接触角测量仪进行材料表征;通过体外抗菌实验(抑菌圈法、涂板法、浊度法、活/死细菌染色)评价样品体外抗菌性能;体外细胞相容性实验(MTT法和细胞荧光染色)评价其生物安全性;细菌细胞共培养实验评价在有菌环境中钛片表面的细胞黏附增殖能力。结果 SEM见碱热预处理后的多孔钛表面随着涂层沉积孔隙依次减小;水接触角测量示pTi组随着酚胺交联涂层的沉积和与CHX的整合,水接触角逐渐增加。XPS检测见EPC组Ti、O含量降低,C、N含量增加,并出现Cl2p特征峰;体外抗菌实验表明EPC组对金黄色葡萄球菌和伴放线放线杆菌均有良好抗菌性能,抗菌能力能维持7 d以上;MTT法和细胞荧光染色显示EPC组细胞数量随时间增长呈明显的递增趋势且形态良好;细菌细胞共培养实验表明EPC组在有菌环境中细胞仍可有效增殖。结论 纯钛表面EGCG/PLL酚胺涂层整合CHX具有良好的抗菌性能和生物安全性,且能在有菌环境中发挥抗菌作用的同时保障细胞的黏附、增殖。
双酚S作为双酚A的替代物被广泛应用于工业生产,但多项研究表明双酚S同样具有多种毒性效应。目前已有研究发现双酚S可对神经系统、内分泌系统、生殖系统等造成不良影响,尤其是在生殖系统方面,相关研究更为深入且广泛。双酚S暴露可引起雄性精子数量减少、活动率下降和畸形率增加,并降低睾酮水平;另一方面,双酚S暴露引起雌性卵巢体积和相对质量显著减少,并影响卵母细胞质量,降低促性腺激素(促卵泡激素、促黄体生成素)水平。双酚S作用于机体的机制复杂多样,涉及氧化应激、细胞凋亡、表观遗传修饰等,其中不同研究中双酚S的生殖毒性存在差异。该文对双酚S致生殖毒性表现及其机制进行综述。
目的 研究四氢姜黄素(THC)和纳米四氢姜黄素(THCN)的抗抑郁作用及机制。方法 将46只雄性ICR小鼠随机分为Con组、脂多糖(LPS)组、THC组、THCN组和舍曲林(SER)组。采用腹腔注射LPS建立小鼠抑郁模型。采用旷场实验和强迫游泳实验评估小鼠的焦虑及抑郁样行为;髓鞘染色法检测长期实验小鼠前额皮层脱髓鞘程度;免疫荧光法检测短期实验小鼠前额皮层和海马组织中胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Toll样受体4(TLR4)表达水平。结果 与Con组相比,长期和短期实验LPS组小鼠焦虑抑郁样行为均增加(P<0.05);长期实验LPS组小鼠脱髓鞘程度增加(P<0.01);短期实验LPS组小鼠GFAP表达减少(P<0.01),TLR4表达增加(P<0.05),THC组小鼠TLR4表达减少(P<0.01),THCN组前额皮层的GFAP表达减少(P<0.01),TLR4表达增加(P<0.05)。与LPS组相比,长期实验THC组小鼠抑郁样行为减少(P<0.05),THCN组和SER组小鼠焦虑抑郁样行为减少(P<0.05),短期实验THC组、THCN组小鼠焦虑抑郁样行为减少(P<0.05);长期实验THC组、THCN组和SER组小鼠脱髓鞘程度均减少(P<0.05);短期实验THC组GFAP表达增加(P<0.05),TLR4表达减少(P<0.05),THCN组GFAP表达增加(P<0.05)。与THC组相比,长期实验THCN组、SER组焦虑样行为减少(P<0.05);短期实验THCN组前额皮层的GFAP表达减少(P<0.05),海马DG区TLR4表达增加(P<0.01)。结论 THC和THCN均能改善脂多糖诱导的小鼠抑郁样行为和脱髓鞘化,THC的抗抑郁机制可能与下调TLR4、增加GFAP有关,THCN的抗抑郁机制可能与增加GFAP有关。
目的 探讨线阵内镜超声(EUS)对胆总管微结石的诊断价值。方法 选取于医院就诊并经EUS诊断为胆总管微结石和胆泥患者资料,从中筛选出住院期间行磁共振胆胰管造影(MRCP)检查和内镜逆行胰胆管造影(ERCP)诊治的患者共85例。以治疗性ERCP/内镜下十二指肠乳头括约肌切开术(EST)结果为金标准。将EUS、MRCP及诊断性ERCP结果(EUS组、MRCP组和诊断性ERCP组)分别与金标准相比较,计算3种检查方法的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值及准确度。结果 85例患者中EUS组阳性共63例,假阳性5例;阴性共22例,假阴性1例。MRCP组阳性共49例,假阳性4例;阴性共36例,假阴性14例;诊断性ERCP组阳性共59例,假阳性10例;阴性共26例,假阴性10例。EUS组诊断胆总管微结石的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值和准确度分别为98.3%、80.8%、92.1%、95.4%和92.9%;MRCP组为76.3%、84.6%、91.8%、61.1%和78.8%;诊断性ERCP组为83.1%、61.5%、83.1%、61.5%和76.5%。EUS诊断胆总管微结石准确度高于MRCP组(χ~2=6.986,P<0.05)和诊断性ERCP组(χ~2=8.900,P<0.05)。EUS组、MRCP组和诊断性ERCP组曲线下面积(AUC)值分别为0.895、0.804、0.723,95%CI分别为(0.802~0.988,P<0.001)、(0.702~0.907,P<0.001)和(0.598~0.848,P=0.001)。结论 在诊断胆总管微结石方面,EUS具有较高的诊断价值,可作为治疗性ERCP术前首选检查方法。
目的 探讨长链非编码RNA表面活性剂相关1假基因(SFTA1P)通过调控微小RNA-182-5p(miR-182-5p)/纤连蛋白1(FN1)通路促进肾透明细胞癌(ccRCC)细胞增殖与迁移的分子机制。方法 应用GEPIA2软件探究TCGA数据库中SFTA1P在ccRCC组织中的表达;实时定量PCR(qPCR)检测SFTA1P在ccRCC组织、正常肾脏组织及ccRCC细胞系中的表达;亚细胞定位实验探究SFTA1P在ccRCC细胞系人肾细胞腺癌细胞(ACHN)中的定位;将ACHN细胞分为si-Con组、si-SFTA1P#2组、mimic NC组、miR-182-5p mimic组、anti-miR-Con组、anti-miR-182-5p组、anti-miR-182-5p+si-FN1组、si-Con+anti-miR-Con组、si-SFTA1P#2+anti-miR-Con组及si-SFTA1P#2+anti-miR-182-5p组;CCK-8与transwell小室实验检测细胞增殖与迁移能力;qPCR、Western blot和双荧光素酶报告基因实验检测SFTA1P、miR-182-5p和FN1的调控关系。结果 TCGA数据库分析显示,SFTA1P在ccRCC组织中高表达(P<0.05);与正常肾脏组织比较,SFTA1P在ccRCC组织中表达升高(P<0.01);ccRCC细胞系786-O、SN12-PM6、ACHN及A498中SFTA1P表达明显高于人肾近曲小管细胞HK-2(均P<0.01);亚细胞定位实验显示SFTA1P主要分布于ACHN细胞的细胞质中;与si-Con组比较,si-SFTA1P#2组ACHN细胞增殖与迁移能力降低,FN1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.05);与mimic NC组比较,miR-182-5p mimic组ACHN细胞FN1 mRNA及蛋白表达降低(P<0.01);与anti-miR-Con组比较,anti-miR-182-5p组ACHN细胞FN1 mRNA及蛋白表达增加,细胞增殖与迁移能力增强(P<0.05);与anti-miR-182-5p组相比,anti-miR-182-5p+si-FN1组ACHN细胞增殖与迁移能力降低(P<0.05);与si-SFTA1P#2+anti-miR-Con组比较,si-SFTA1P#2+anti-miR-182-5p组ACHN细胞增殖与迁移能力增强,FN1 mRNA及蛋白表达增加(P<0.05)。结论 SFTA1P在ccRCC中高表达,其通过调控miR-182-5p/FN1通路促进ccRCC细胞的增殖与迁移。
目的 探究染色体不稳定(CIN)相关基因多肽N-乙酰半乳糖氨基转移酶7(GALNT7)对结肠癌细胞HCT116增殖和凋亡的影响。方法 采用慢病毒感染构建敲低GALNT7的HCT116细胞系,通过染色体滴定验证GALNT7与CIN的相关性,运用活细胞计数检测GALNT7对细胞增殖的影响,采用流式细胞术和Western blot检测GALNT7对细胞周期的影响,采用Caspase-3酶活性测定和Western blot检测GALNT7对细胞凋亡的影响。结果 敲低GALNT7后HCT116细胞染色体核型分布更为分散,CIN程度增高,细胞增殖速度减慢;敲低GALNT7后HCT116细胞发生细胞周期阻滞,并且细胞内P21蛋白上调,CDK6蛋白下调;敲低GALNT7后HCT116细胞Caspase-3酶活性上升,切割型PARP1蛋白和PUMA蛋白表达量升高,BCL-2蛋白表达量下降。结论 GALNT7基因可能通过抑制CIN产生促进结肠癌细胞增殖并抑制其凋亡。
目的 通过网络药理学和动物实验探讨葛根素治疗类风湿关节炎(RA)的作用机制。方法 使用中药系统药理学数据库和分析平台(TCMSP)和SwissTargetPrediction数据库收集葛根素靶点,使用GeneCards、OMIM数据库获取RA的疾病相关靶点,利用Cytoscape 3.7.2软件建立蛋白-蛋白相互作用(PPI)网络,通过Metascape数据库进行基因本体(GO)功能和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析;使用Ⅱ型胶原乳剂复制RA大鼠-胶原诱导型关节炎(CIA)模型,将49只Wistar大鼠随机分为空白对照(Con)组,CIA模型(CIA)组,低、中、高剂量葛根素(L-、M-、H-puerarin)组,甲氨蝶呤(MTX)组,雷公藤多苷片(TGT)组。除Con组外,其余各组大鼠制成CIA大鼠模型后连续灌胃28 d。观察各组大鼠后肢关节红肿情况及踝关节病理改变,Western blot检测滑膜糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达,qPCR检测滑膜GSK-3β、β-catenin、c-Myc mRNA表达。结果 获得134个葛根素作用靶点,RA疾病相关靶点基因5 821个,葛根素与RA交集靶点基因102个,涉及JAK-STAT、NF-κB、Wnt等184条信号通路。动物实验结果表明,M-puerarin和MTX干预后大鼠后足红肿症状改善并且关节滑膜中炎性细胞浸润明显减少,软骨及骨组织破坏程度减轻。与CIA组相比,M-puerarin干预后的大鼠滑膜组织中GSK-3β、β-catenin蛋白表达和GSK-3β、β-catenin、c-Myc mRNA表达均下降(P<0.05)。结论 葛根素可以通过多靶点、多途径协同治疗RA,可能通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,缓解CIA大鼠滑膜增生,减轻关节软骨侵蚀及骨破坏情况。
目的 观察缺氧缺血时脑组织损伤情况及使用参附注射液(SFI)后的病理改变、铁死亡相关因子的表达,探讨SFI通过抑制铁死亡发挥对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的保护作用机制。方法 构建SD大鼠HIBD模型,并用SFI进行干预。HE染色观察脑组织病理改变;尼氏染色观察神经元存活情况;Western blot、免疫组织化学、免疫荧光法检测脑组织谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二价金属离子转运蛋白1(DMT1)的表达;试剂盒检测还原型谷胱甘肽(GSH)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及组织铁含量。体外培养小鼠小胶质细胞系(BV2),分为对照(Ctrl)组、氧糖剥夺(OGD)组、铁死亡诱导(Erastin)组、铁死亡抑制(Fer-1)组、SFI组、Erastin+SFI组,2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)活性氧(ROS)荧光探针检测ROS释放水平;免疫荧光染色观察细胞内GPX4、DMT1表达。结果 与Sham组相比,HIBD组大鼠脑组织中出现明显的神经细胞受损,GPX4表达下降(P<0.01),DMT1表达升高(P<0.01),GSH与SOD含量下降(P<0.01),LDH、MDA及组织铁含量上升(P<0.05,P<0.05,P<0.01);而SFI干预后,与Sham组相比,GPX4表达升高(P<0.01),DMT1表达下降(P<0.01),GSH与SOD含量升高(P<0.01),LDH、MDA及组织铁含量降低(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。BV2细胞实验显示:与Ctrl组相比,OGD组ROS含量明显升高且GPX4荧光强度表达明显下降、DMT1荧光强度上升(P<0.01);与OGD组相比,SFI组ROS含量降低,同时GPX4的表达升高,DMT1的表达降低(P<0.01)。结论 新生HIBD大鼠海马及皮质区损伤严重,GPX4表达下降、DMT1表达升高,提示铁死亡参与新生大鼠HIBD脑损伤,而SFI通过减少铁的聚集,减少ROS的产生,对HIBD实验动物模型和BV2细胞损伤模型具有保护作用。
目的 探究脑微血管组织块培养法提取原代大鼠脑微血管内皮细胞并对其进行鉴定。方法 取4周龄SD大鼠脑皮层,经过筛网、预消化、微血管组织块固化处理后,置于CO_2培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色法鉴定所培养的目的细胞。结果 体外培养48 h后短梭形细胞从脑微血管段周围爬出;72 h后岛屿状的细胞团簇形成;96 h后团簇融合,细胞呈典型的单层铺路石样镶嵌式排列生长。第Ⅷ因子相关抗原免疫细胞化学染色法检测显示,细胞胞质呈棕红色,表达为阳性,细胞核被苏木精衬染成蓝黑色。结论 脑微血管组织块培养法能够成功提取原代大鼠脑微血管内皮细胞。
目的 探究YTH结构域家族蛋白1(YTHDF1)调控线粒体分裂蛋白1(Fis1)介导的线粒体裂变对肝星状细胞(HSCs)活化、增殖和迁移能力的影响。方法 应用5 ng/ml TGF-β1处理小鼠肝星状细胞株JS-1 24 h以诱导其活化和增殖,并使用YTHDF1-siRNA构建YTHDF1沉默模型。实验分为Control组、TGF-β1组、TGF-β1+si-NC组和TGF-β1+si-YTHDF1组。通过逆转录定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和蛋白质印迹(Western blot)实验检测YTHDF1、Fis1及纤维化关键指标Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达变化;利用CCK-8实验检测细胞增殖能力;通过Transwell迁移实验和细胞划痕实验检测细胞迁移能力;使用免疫荧光染色实验检测YTHDF1对Fis1介导的线粒体裂变的影响;最后通过JC-1染色实验检测YTHDF1对线粒体膜电位的影响。结果 与Control组相比,RT-qPCR和Western blot实验结果显示,TGF-β1组中YTHDF1和Fis1的表达增加(P<0.05,P<0.01;P<0.000 1),以及纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的表达水平增加(P<0.01;P<0.001,P<0.000 1);CCK-8实验结果显示,TGF-β1组中HSCs的增殖能力增强(P<0.000 1);Transwell实验结果显示,TGF-β1组中HSCs的迁移能力增强(P<0.01);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1组中HSCs的迁移能力增强(P<0.000 1);免疫荧光实验结果显示,TGF-β1组中Mito-Tracker Red染色与Fis1共定位信号增加(P<0.05);JC-1染色实验结果显示,TGF-β1组中线粒体膜电位升高(P<0.01)。与TGF-β1+si-NC组相比,RT-qPCR和Western blot实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中YTHDF1和Fis1的表达降低(P<0.01;P<0.001),纤维化标志物CollagenⅠ和α-SMA的水平降低(P<0.01;P<0.001,P<0.01),CCK-8实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中HSCs的增殖能力减弱(P<0.000 1);Transwell实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中HSCs的迁移能力减弱(P<0.001);细胞划痕实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中HSCs的迁移能力减弱(P<0.000 1);免疫荧光实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中Mito-Tracker Red染色与Fis1共定位信号减少(P<0.01);JC-1染色实验结果显示,TGF-β1+si-YTHDF1组中线粒体膜电位下降(P<0.05)。结论 YTHDF1通过正向调控Fis1介导的线粒体裂变,促进了HSCs的活化、增殖和迁移能力。提示YTHDF1可能是参与调控HSCs活化、增殖和迁移的关键基因。