SIRT2对Ang Ⅱ诱导的小鼠心肌成纤维细胞增殖与迁移影响的研究
林丽婵;刘芷言;刘震宇;刘鹏;毛遂;张云森;胡宪文;李锐;陶辉;目的 探讨去乙酰化酶2(SIRT2)在血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激下对小鼠心肌成纤维细胞(CFs)增殖与迁移的作用。方法 对1～2 d内的C57BL/6乳鼠心脏进行无菌摘取，碎化为组织匀浆、消化、过滤后提取分离的CFs。CFs贴壁生长至70%～80%汇合度后，加入AngⅡ诱导构建体外CFs活化增殖模型，AngⅡ刺激24 h后分别向各组CFs转染空载质粒及SIRT2过表达质粒，后继续培养1～2 d。应用RT-qPCR方法检测SIRT2、增殖细胞核抗原(PCNA)、骨膜素(POSTN)和Ⅰ型胶原A1(Col1A1)的mRNA相对表达量；Western blot方法探测SIRT2、PCNA、POSTN和Col1A1的蛋白相对表达量；CCK-8法与EdU法探测CFs增殖活力；Transwell实验检测CFs迁移能力。结果 与CFs空白对照组相比，AngⅡ导致CFs的SIRT2表达量减少与细胞外基质蛋白表达增多，同时CFs的活化增殖明显增高。使用质粒过表达SIRT2上调AngⅡ诱导环境下CFs SIRT2表达后，与空载组相比，过表达组SIRT2表达上调，胶原纤维蛋白表达量降低，同时CFs的增殖与活化明显减少。结论 过表达SIRT2能抑制AngⅡ诱导的胶原纤维沉积与CFs活化增殖，SIRT2通过调节AngⅡ诱导环境下CFs活化与增殖，也为心肌纤维化的干预与治疗提供了新的思路。
内侧前额叶皮质PTGES3/HSP90调控肥胖相关认知障碍的机制研究
汪堇颜;胡佳;胡锐;黄春霞;薛琦;目的 研究内侧前额叶皮质前列腺素E合成酶3(PTGES3)/热休克蛋白90(HSP90)调控肥胖相关认知功能障碍的作用机制。方法 该研究分为临床试验和动物实验2个部分。第一部分，选择拟行减重手术的肥胖症患者，同期招募性别、年龄相匹配的健康成年人，每组各10例。以连线测试A(TMT-A)和维多利亚斯特鲁普测试(VST)评估认知水平。采用四维数据非依赖采集(4D-DIA)方法筛选外周血中蛋白组变化。第二部分，选取40只SPF级健康雄性C57BL/6J小鼠随机平分为4组：(1)普通饮食喂养组(ND组);(2)高脂饮食诱导肥胖组(DIO组);(3)高脂饮食诱导肥胖+对照病毒注射组(DIO+Scramble组);(4)高脂饮食诱导肥胖+干扰病毒注射组(DIO+shPTGES3组)。使用Morris水迷宫实验评估4组小鼠的认知行为变化。采用免疫荧光染色法检测内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的含量以及离子钙接头蛋白分子1(IBA1)标记的小胶质细胞活化水平。结果 病例-对照研究结果显示，肥胖组患者认知功能显著降低，同时外周血中PTGES3含量明显增加，且PTGES3水平与认知功能呈负相关。动物实验中，与ND组比较，DIO组小鼠Morris水迷宫实验潜伏期延长和目标象限停留时间缩短，伴有内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的含量明显增多以及小胶质细胞的活化水平升高。与DIO+Scramble组比较，DIO+shPTGES3组小鼠的Morris水迷宫实验潜伏期缩短，目标象限停留时间延长，内侧前额叶皮质PTGES3和HSP90的表达以及共定位水平均明显降低，小胶质细胞的活化水平也减少。结论 肥胖相关认知功能障碍可能与内侧前额叶皮质PTGES3/HSP90介导的中枢神经炎症有关。
miR-29a介导双氢青蒿素对肺腺癌B7H3分子调控
朱亚玉;凌惠娟;牛可;唐静;陈礼文;目的 探究microRNA-29a(miR-29a)介导双氢青蒿素(DHA)对肺腺癌(LUAD)免疫检查点分子B7H3的调控机制。方法 利用公共数据库分析B7H3在肺腺癌中的表达水平和预后意义。采用小干扰RNA(siRNA)敲减肺腺癌细胞株A549和HCC827中B7H3分子，CCK-8法检测细胞增殖。将梯度浓度的DHA(0、5、10、25、50、100μmol/L)处理A549与HCC827细胞48 h,计算半数抑制浓度(IC50),以IC50浓度DHA处理A549和HCC827细胞1、2、3 d, CCK-8法检测细胞增殖。采用miR-29a inhibitor转染A549、HCC827细胞，DHA处理后RT-qPCR检测miR-29a表达水平，Western blot检测B7H3表达水平。结果 B7H3在肺腺癌中过度表达，与预后不良相关。敲低B7H3后A549、HCC827细胞增殖能力显著降低(均P<0.001)。DHA以剂量和时间依赖形式抑制A549、HCC827细胞增殖，IC50分别是30.16μmol/L和7.50μmol/L。DHA上调A549、HCC827细胞miR-29a表达(P<0.001,P<0.01),同时下调B7H3表达(P<0.01,P<0.001)。A549、HCC827细胞转染miR-29a inhibitor后，B7H3表达上调，并且部分逆转DHA对B7H3的下调作用。结论 miR-29a介导DHA对肺腺癌B7H3分子调控。
Erastin和RSL3诱导肝癌铁死亡体外模型的构建
朱欣悦;任俏慧;臧艳;周心怡;姚骏骁;王莲子;沙旭栋;李涛;目的 运用浓度倍增的铁死亡诱导剂Erastin和RAS选择性致死分子3(RSL3)体外诱导肝癌细胞，并构建体外肝癌铁死亡模型，为开发针对肝癌的新型治疗策略提供理论依据。方法 以浓度倍增的Erastin(0～40μmol/L)和RSL3(0～10μmol/L)分别干预对数生长期肝癌细胞(HCCLM3、HepG2、Hep3B、Huh7和PLC/PRF/5),24 h后运用CCK-8法检测细胞活力，绘制生长曲线，计算半抑制浓度(IC50),选择对诱导剂敏感的肝癌细胞进行后续实验。光镜下观察诱导剂对细胞状态的影响；通过免疫印迹技术和流式细胞术验证体外铁死亡模型是否构建成功。结果 在5种肝癌细胞中，Huh7、Hep3B和HepG2细胞对铁死亡诱导剂Erastin和RSL3较为敏感，HCCLM3和PLC/PRF/5对Erastin和RSL3不敏感，当Erastin和RSL3的浓度达最大时，存活率仍有65%以上。因此，选择Huh7、Hep3B和HepG2细胞用于后续实验。分别按照Erastin和RSL3浓度梯度干预肝癌细胞，与对照组比较，铁死亡标志分子谷胱甘肽过氧化物酶4 (GPX4)表达量随着Erastin和RSL3的浓度依赖性下调。在Huh7、Hep3B和HepG2细胞中，分别用10μmol/L和20μmol/L Erastin作用24 h后脂质活性氧(ROS)水平与对照组比较，显著增加；在Huh7细胞中，分别用0.5μmol/L和1μmol/L RSL3作用24 h后的脂质ROS水平与对照组比较，显著增加；在Hep3B和HepG2细胞中，分别用1μmol/L和2μmol/L RSL3作用24 h后的脂质ROS水平与对照组比较，显著增加。结论 Huh7、Hep3B和HepG2细胞对Erastin和RSL3敏感性高。10μmol/L Erastin作用24 h处理Huh7、Hep3B和HepG2细胞是体外模拟Erastin诱导肝癌铁死亡的良好模型；0.5μmol/L RSL3作用24 h处理Huh7细胞以及1μmol/L RSL3作用24 h处理Hep3B和HepG2细胞是体外模拟RSL3诱导肝癌铁死亡的良好模型。
安徽汉族心脑血管疾病患者SLCO1B1和ApoE基因多态性分析
李洁;程筱雯;许翔;哈传博;胡文君;陶晖;目的 分析安徽地区汉族溶质载体有机阴离子转运蛋白家族成员1B1(SLCO1B1)和载脂蛋白E(ApoE)的基因多态性分布，为临床个体化使用他汀类药物提供理论支持。方法 选取924例心脑血管疾病患者，采用聚合酶链反应-荧光探针法检测患者SLCO1B1和ApoE基因型，并比较其在不同性别和中国其他地区之间的分布。结果 924例中检测出7种SLCO1B1基因亚型，分别为*1a/*1b(33.01%)、*1b/*1b(41.45%)、*1b/*15(12.34%)、*1a/*1a(7.03%)、*1a/*15(5.52%)、*15/*15(0.54%)及*5/*5(0.11%),未检测到*1a/*5、*5/*15这两种基因亚型；SLCO1B1Ⅰ类正常代谢基因型(*1a/*1a、*1a/*1b、*1b/*1b)占比最高(81.49%),SLCO1B1Ⅱ类中间代谢基因型、Ⅲ类弱代谢基因型分别占比17.86%及0.65%;检出6种ApoE基因亚型，分别为E3/E3(66.78%)、E3/E4(19.37%)、E2/E3(9.63%)、E4/E4(1.84%)、E2/E4(1.73%)及E2/E2(0.65%),其中E3大众基因型(E2/E4、E3/E3)占比最高，为68.51%;不同性别之间SLCO1B1和ApoE基因分布差异均无统计学意义；安徽汉族人群SLCO1B1基因分布与中国华南、华中地区相比差异无统计学意义，与西南地区相比差异有统计学意义(P<0.05);安徽汉族人群ApoE基因分布与华南、西南差异无统计学意义，与华中地区相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 安徽地区汉族心脑血管疾病人群SLCO1B1和ApoE基因多态性分布不存在性别差异，却存在一定的地域差异，分别以Ⅰ类正常代谢基因型和大众类基因型E3为主，说明本群体对他汀耐受剂量较高，治疗效果正常。
基于生物信息学分析VCAN作为结直肠癌顺铂耐药关键靶点研究
李静娴;陈辉广;吴建泽;王德权;陈志芬;吴清明;目的 预测并验证结直肠癌(CRC)顺铂(DDP)耐药的关键靶点，为临床精准医学治疗提供更多方案。方法 通过基因表达综合数据库(GEO)筛选出正常肠黏膜和CRC之间差异表达基因(DEGs);采用STRING数据库和Cytoscape软件挖掘关键基因；采用基因本体联合数据库(GO)与京都基因与基因组百科全书(KEGG)对DEGs进行富集分析；利用高通量转录组测序鉴定、qRT-PCR、Western blot筛选、验证关键靶点；将多能蛋白聚糖(VCAN)基因过表达载体转染至人回盲部结直肠腺癌细胞(HCT8)细胞系，CCK-8检测细胞活力；流式细胞术测定细胞凋亡与细胞周期；qRT-PCR与Western blot检测基因mRNA和蛋白水平。结果 通过GEO数据库筛选出了118个上调的DEGs和146个下调的DEGs。DEGs主要富集于细胞外基质分解、细胞外基质和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶(PI3K-AKT)信号通路。基于蛋白质相互作用网络分析，鉴定出20个枢纽基因。通过对比CRC细胞系HCT8亲本株与DDP耐药株的转录组测序结果，进一步筛选出VCAN基因。在CRC组织中，VCAN基因的表达水平高于正常肠黏膜组织；相对于VCAN低表达患者，VCAN高表达的患者总生存期(OS)与无复发生存时间(RFS)更短。在CRC细胞系中，过表达VCAN基因促进了细胞的增殖(P<0.05),提高了细胞对DDP的耐药性，减少了DDP诱导的凋亡(P<0.05)与G_0/G_1期阻滞(P<0.05);上调VCAN基因激活AKT-雷帕霉素靶蛋白1(mTOR)信号通路。结论 基于生物信息学和转录组测序筛选出CRC DDP耐药靶基因VCAN,VCAN基因可能通过调控AKT-mTOR通路促进CRC发展与对DDP的耐药性。
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