2025年 10期
miHA-TM在低强度预处理下改善供体骨髓移植的效果研究
蒲雅静;周猛;目的 异基因造血干细胞移植(alloSCT)广泛应用于恶性、非恶性血液疾病的治疗。然而，因其易引发移植物抗宿主病(GVHD)以及供者匹配困难，且受体采用的清髓预处理易引发移植相关死亡等原因，因此，亟需在降低预处理强度的同时，提升供者骨髓植入效果的新策略。方法 在alloSCT模型中，过继次要组织相容性抗原(miHA)特异性供体中枢记忆性T细胞(miHA-TM),并联合使用CD40激动剂，探讨不同辐照剂量条件下供体骨髓植入的效果。结果 miHA特异性供者源中枢记忆性T细胞(TM)可促进受体免疫重建，且不会引发GVHD。但供者源TM细胞在受体免疫重建过程中发生耗竭，影响低预处理强度下的受体获得完全供体植入。在低辐照剂量下(4 Gy),miHA-TM联合CD40激动剂可促进供体骨髓植入。结论 miHA-TM可促进受体免疫重建，且不会诱发移植物抗宿主病。
Prohibitin 2经NF-κB信号通路加重脂多糖诱导的牙周骨组织炎症
赵静心;胡佳敏;高纪科;程铭;朱友明;孙晓瑜;目的 阐明抗增殖蛋白2 (PHB2)通过调控核因子κB(NF-κB)信号通路介导牙周炎骨组织炎症反应的具体分子机制，揭示其在牙槽骨不可逆吸收这一关键病理过程中的作用。方法 本研究通过体内实验，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和免疫组织化学技术(IHC)技术检测牙周炎模型小鼠的牙槽骨组织中炎症因子及PHB2的表达差异。体外实验中，用脂多糖(LPS)诱导小鼠胚胎成骨细胞前体细胞MC3T3-E1炎症模型，通过Western blot和qRT-PCR明确PHB2与炎症因子的调控关系，并观察PHB2亚细胞定位变化。通过分子克隆构建PHB2过表达质粒，用RNA干扰敲低PHB2表达，评估其对炎症反应的调控作用。基于RNA-seq数据，采用基于负二项分布的差异表达分析2(DESeq2)进行差异表达分析，结合京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析和基因本体(GO)功能注释，分析并筛选关键信号通路及差异表达基因。结果 在实验性小鼠牙周炎模型中，PHB2在牙周炎组小鼠的牙槽骨组织中的表达量明显上调。在体外细胞炎症模型中，PHB2与白细胞介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)炎性因子表达量呈正相关，且随着炎症的发生，PHB2在炎症细胞中的亚定位发生了变化；最后，通过高通量测序检测各组细胞磷酸化p65蛋白(p-p65)表达量变化及上下游基因表达，结果显示，PHB2通过NF-κB信号通路加重了细胞的炎性反应，并且与上游C-X-C基序趋化因子配体10 (CXCL10)基因的表达水平有关联。结论 PHB2通过NF-κB信号通路加重LPS诱导的牙周炎炎症，为进一步研究牙周炎发生发展过程的分子机制提供了新的研究方向。
黄芪多糖调控乳腺癌细胞来源的外泌体及其对巨噬细胞极化和抗肿瘤效应的影响
关晨娟;解彩霞;郑晓娇;包娜娜;王露;白文慧;乔姝;张浩楠;目的 探讨黄芪多糖(APS)调控乳腺癌来源的外泌体中miR-107和miR-346介导的巨噬细胞极化对乳腺癌细胞增殖和转移的影响及机制。方法 选取8周龄雌性BALB/c小鼠40只，分别构建乳腺癌异种移植瘤模型和4T1移植肿瘤模型。分为对照组和APS组，APS组裸鼠每日APS灌胃治疗共25 d,对照组裸鼠分别给予等量的生理盐水，在完成所有治疗后，对裸鼠实施安乐死，分离肿瘤组织。采用Western blot和流式细胞术检测增殖细胞核抗原(PCNA)、Ki-67、CD206、CD163、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和CD86的表达，分析肿瘤组织中单细胞悬液的凋亡情况。人乳腺癌细胞MDA-MB-231细胞培养并使用APS刺激，收集细胞培养基外泌体，采用CCK-8法、划痕法、透孔室细胞侵袭实验、qRT-PCR检测细胞的增殖、迁移和侵袭情况。生物信息学筛选差异基因。结果 通过测定与乳腺癌细胞增殖和转移相关的分子表达，显示APS治疗降低了MDA-MB-231异种移植瘤组织中增殖相关蛋白(PCNA和Ki-67)和转移相关蛋白(波形蛋白)的表达；并观察到肿瘤相关巨噬细胞的极化情况，APS处理4T1移植肿瘤组织可降低M2巨噬细胞的数量，增加M1巨噬细胞的数量，致使M2/M1巨噬细胞数量的比例降低，增加了4T1移植肿瘤组织的细胞凋亡。且相关蛋白的表达情况是iNOS和CD86增加，CD206和CD163降低。MDA-MB-231产生的外泌体经APS处理降低了M2巨噬细胞的极化，并且影响miR-107和miR-346表达。结论 APS通过调节乳腺癌细胞来源的外泌体中miR-107或miR-346的表达来抑制M2巨噬细胞极化，最终抑制乳腺癌细胞的增殖和转移。
STAT4在肺腺癌中的表达及其功能研究
柴倩;张砚珂;吴敏;赵磊;目的 探讨信号转导与转录激活因子4(STAT4)在肺腺癌(LUAD)中的表达水平，并分析其对LUAD细胞增殖、侵袭和迁移能力的影响。方法 通过高通量基因表达数据库(GEO)、人类蛋白质图谱数据库(HPA)以及卡普兰-迈耶绘图数据库(Kaplan-Meier Plotter)探究STAT4在LUAD中的表达及对患者生存的影响。使用慢病毒包装技术构建STAT4敲低的LUAD细胞稳系，然后用RT-qPCR检测STAT4的敲低效率。再利用CCK-8技术和细胞克隆形成实验检测STAT4对LUAD细胞增殖的影响，同时利用细胞划痕试验和Transwell实验检测STAT4对LUAD细胞侵袭和迁移能力的影响。结果 STAT4在LUAD中低表达，且其低表达不利于LUAD患者的生存。在LUAD中敲低STAT4后，LUAD细胞的增殖、侵袭和迁移能力增强。结论 STAT4是LUAD中的预后标记蛋白，对LUAD细胞的增殖、侵袭和迁移能力有抑制作用，其有望成为新的治疗靶点。
宫颈癌中COL1A2的表达及其与肿瘤免疫浸润的关系
张瑜;朱小雨;徐殿琴;陈晓伟;钟明艳;周鑫竹;谭玉洁;目的 探讨Ⅰ型胶原α2链(COL1A2)在宫颈癌中的表达及与免疫浸润的相关性。方法 利用生物信息学技术分析宫颈癌中COL1A2的表达，Western blot和RT-qPCR检测宫颈癌组织和细胞系中COL1A2的表达；肿瘤免疫评估(TIMER2.0)分析COL1A2的表达与肿瘤免疫细胞浸润的相关性；基因集富集分析(GSEA)分析COL1A2在宫颈癌中可能的作用机制，Jaspar数据库预测COL1A2的转录因子，Western blot和RT-qPCR检测宫颈癌组织和细胞系中转录因子的表达。结果 COL1A2在宫颈癌中表达下调(P<0.05);COL1A2的表达与巨噬细胞和髓样树突细胞的水平呈正相关(P<0.01),22种免疫细胞在不同的宫颈癌患者中的占比不同，此外，与COL1A2高表达组相比，低表达COL1A2组中M0巨噬细胞、M2巨噬细胞和静息记忆CD4+ T细胞比例上升，而CD8+ T细胞、活化记忆的CD4+ T细胞、滤泡辅助T细胞、活化NK细胞、活化髓样树突细胞减少(P<0.05);GSEA分析显示，COL1A2与免疫相关的信号通路有关，包括Notch信号通路、白细胞介素6/JAK激酶/转录激活因子3(IL6/JAK/STAT3)、Wnt/β-catenin信号通路等(P<0.01),Jaspar数据库预测COL1A2的转录因子配对盒蛋白5(PAX5),PAX5在宫颈癌中表达降低(P<0.05)。结论 COL1A2有望成为宫颈癌潜在的诊断生物标志物及免疫治疗靶点。
基于基因表达数据库筛选肺腺癌耐药相关分子标志物及其临床意义
韦韩东;陈数星;刘琳婷;景子涵;杨译婷;宋琼;王闻楚;邹春林;王丽惠;目的 以基因表达数据库中已发表的芯片数据为基础，使用生物信息学方法筛选差异表达基因，以期发现与肺腺癌诊断/预后及耐药性相关的分子标志物。方法 对基因表达综合数据库(GEO)中已发表的肺腺癌mRNA芯片数据集GSE32863和肺腺癌耐药mRNA芯片数据集GSE77209进行差异表达分析；通过生物学功能注释、基因通路富集分析、蛋白质相互作用网络分析等生物信息学方法发现和识别与差异表达基因相关的生物学功能和信号通路；在癌症基因组图谱(TCGA)肺腺癌数据集中验证差异表达基因在正常肺组织和癌组织中的表达及对肺腺癌患者生存的影响；基于CellMiner跨数据库平台(CellMiner CDB)中癌症药物敏感性基因组学数据集(GDSC),通过Pearson相关分析法分析差异表达基因与抗癌药物半数抑制浓度(IC50)之间的相关性。结果 共77个基因在肺腺癌组织和耐药细胞中显著性差异表达。差异表达基因主要富集到了微管、外泌体、细胞周期、核受体的信号传导等癌症相关生物学过程。构建蛋白质相互作用(PPI)网络筛选分子复合物子网络(MCODE),其中5个相关性最高的基因作为耐药核心基因，包括泛素偶联酶E2 T(UBE2T)、驱动蛋白家族成员20A(KIF20A)、PCNA钳夹相关因子(KIAA0101)、垂体瘤转化基因-1(PTTG1)和NIMA相关激酶2(NEK2)。生存分析结果显示这5个基因在肺腺癌组织和耐药细胞中均上调并与肺腺癌患者的不良预后显著相关。药敏分析结果提示高表达PTTG1和UBE2T与包括紫杉醇、多烯紫杉醇在内的多种抗肿瘤药物的敏感性显著性相关。RT-PCR验证显示PTTG1和UBE2T在A549和H358多烯紫杉醇耐药细胞(A549-TXR和H358-TXR)中高表达。结论 PTTG1和UBE2T具备成为肺腺癌耐药分子标志物的潜能。
TFEB-自噬途径在利福平所致肝损伤中的作用及其机制
徐红梅;宋育林;目的 探究转录因子EB(TFEB)-自噬途径在利福平所致肝损伤中的作用及其可能机制。方法 将40只6～8周龄的C57/BL6雄性小鼠随机分为五组：对照组、模型组、TFEB低剂量激动剂组、TFEB高剂量激动剂组、自噬激动剂组，每组8只。除对照组外，其余四组每天给予利福平200 mg/(kg·d)灌胃；TFEB激动剂在给予利福平后1 h腹腔注射，低剂量为20 mg/kg,高剂量为50 mg/kg,连续7 d;自噬激动剂在第1天给予利福平前6 h予10 mg/kg灌胃。造模7 d后结束实验。实验通过检测肝功能指标和肝脏病理学变化来评估肝损伤程度，采用Western blot定量分析肝脏细胞核/肝组织中总的TFEB、螯合体1(p62)、微管相关蛋白轻链3(LC3)、苄氯素1(Beclin-1)、钠离子-牛磺胆酸钠共转运多肽(NTCP)、胆盐输出泵(BSEP)的水平。结果 与对照组相比，模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)以及总胆汁酸(TBA)的水平升高，差异有统计学意义(P<0.05),肝脏出现明显病理变化；与模型组相比，TFEB激动剂高剂量、低剂量和自噬激动剂组小鼠上述指标降低(P<0.05);与TFEB激动剂低剂量组相比，高剂量组小鼠上述指标降低(P<0.05)。对照组TFEB入核比例为(1.0±0.10),模型组降至(0.6±0.05)(P<0.05),TFEB低剂量激动剂组恢复至(0.8±0.08),高剂量激动剂组提高至(0.9±0.07),自噬激动剂组为(0.7±0.06)(P<0.05)。与对照组相比，模型组小鼠肝脏NTCP和BSEP的表达水平降低(P<0.05),在TFEB低剂量和高剂量激动剂组中，NTCP和BSEP表达有所恢复，自噬激动剂组NTCP和BSEP表达也提高(P<0.05)。与对照组相比，模型组小鼠肝脏组织中TFEB、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而p62的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与模型组相比，TFEB激动剂高剂量组、低剂量组和自噬激动剂组小鼠肝脏组织中TFEB、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ和Beclin-1的蛋白表达水平有所升高(P<0.05),而p62的蛋白表达水平有所降低(P<0.05)。结论 TFEB通过激活自噬途径可改善利福平所致的肝损伤，主要机制可能与上调NTCP和BSEP的表达有关。
银杏叶提取物下调TLR4/NLRP3信号保护COPD大鼠气道炎症损伤
潘颖;莫雪妮;王戈睿;冯玉青;谢芳;毛美玲;韦婷婷;向晶;黄连健;魏凡博;杨益宝;目的 探讨银杏叶提取物对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠气道炎症损伤及Toll样受体4(TLR4)/NOD样受体蛋白3(NLRP3)通路的调控作用。方法 选取36只雄性SD大鼠，并随机将其分为四个组别：正常对照组、模型组、泼尼松治疗组以及银杏叶提取物治疗组，每组9只，除正常对照组外，其余各组均通过气管内灌注脂多糖(LPS)联合烟熏构建COPD大鼠模型。造模成功后连续给药12周，随后进行取材。观察大鼠的一般状况及呼吸系统症状。通过苏木精-伊红(HE)染色技术观察肺组织的病理变化；采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)法检测大鼠肺组织中TLR4、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和NLRP3的mRNA及蛋白表达水平。结果 与正常对照组相比，模型组大鼠肺组织明显受损，TLR4、TNF-α、IL-1β、NLRP3蛋白和mRNA表达增加(P<0.05)。与模型组相比，泼尼松组和银杏叶提取物组肺组织损伤减轻，TLR4、TNF-α、IL-1β、NLRP3蛋白和mRNA表达降低(P<0.05)。结论 银杏叶提取物可能通过抑制TLR4/NLRP3信号通路减少COPD大鼠肺组织TLR4、TNF-α、IL-1β、NLRP3表达量，减轻其气道炎症反应。
基于AKT-FOXO1-IL-9通路探讨葛根素治疗类风湿关节炎大鼠效果评价
刘小瑜;于涵;余杰;高静茹;马庆庆;石继海;董向力;郝金奇;殷若澜;余艳琴;目的 基于蛋白激酶B(AKT)-磷酸化叉头框蛋白O1(FOXO1)-白介素(IL)-9(AKT-FOXO1-IL-9)信号通路，探究葛根素治疗类风湿关节炎(RA)大鼠的疗效机制。方法 将36只大鼠随机分为空白组，模型组，阳性对照组，葛根素低、中、高剂量组，除空白组外，其余组采用Ⅱ型胶原诱导建立RA大鼠模型。造模成功后，给予不同剂量葛根素和甲氨蝶呤治疗，检测大鼠体质量和足趾厚度，采用生化方法检测大鼠血液流变学指标，采用X光观察大鼠关节形态变化，采用番红固绿染色观察大鼠关节组织的病理学，ELISA法检测大鼠血清中IL-9及类风湿因子水平，Western blot检测蛋白AKT、FOXO1的变化。结果 与空白组相比，模型组大鼠足趾厚度最厚，X线光片显示关节狭窄比较明显，边缘性骨侵袭较重；番红固绿染色显示关节边缘出现毛刺样改变，伴有炎症细胞的渗出，软骨细胞增殖分泌加剧；炎症因子IL-9及类风湿因子水平表达最高，AKT、FOXO1蛋白表达量最高(P<0.05)。与模型组相比，不同剂量葛根素治疗组大鼠足趾厚度降低；X光片显示，葛根素治疗组大鼠脚掌关节狭窄及边缘性骨侵袭有改善；番红固绿染色结果显示，不同剂量的葛根素治疗后，炎症细胞渗出减少，炎症因子IL-9及类风湿因子、AKT、FOXO1蛋白表达水平降低且差异均有统计学意义(P<0.05),其中高剂量葛根素组最明显。与高剂量的葛根素组相比，阳性对照组以上结果均降低且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 葛根素通过抑制AKT-FOXO1-IL-9通路对RA大鼠具有良好的疗效，其中葛根素高剂量组(60 mg/kg)的疗效最好且存在剂量反应关系。
虎杖苷通过调节G0S2和ATGL表达改善非酒精性脂肪肝病的研究
盛鲁光;刘丹丹;刘维斌;雷涛;陈清光;陆灏;徐碧林;目的 本研究旨在探讨虎杖苷(PD)对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型及人肝癌细胞系G2(HepG2)细胞模型的影响，揭示其潜在分子机制。方法 30只6周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠，随机分为正常饮食组和高脂饮食组，后者建立NAFLD小鼠模型后进一步分为高脂饮食(HFD)组和虎杖苷治疗(PD)组。PD组灌胃给药PD 250 mg/(kg·d),为期10周，期间监测体质量并进行口服葡萄糖和胰岛素耐量测试。实验结束时，通过一系列实验评估PD对小鼠肝重、血脂、肝脏脂质积累及肝损伤标志物的影响。通过qRT-PCR和Western blot法检测G0/G1开关基因2(G0S2)和脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达，并通过免疫组织化学染色再次验证基因表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估PD对HepG2细胞活性的影响，油红O染色观察脂质积累，通过qRT-PCR和Western blot法检测G0S2和ATGL的表达，并验证了G0S2被敲低后脂质积累和基因表达的改变。结果 PD降低小鼠体质量、肝重及血清和肝组织中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平(P<0.05),减轻肝组织病理损伤，降低G0S2表达(P<0.05),增加ATGL表达(P<0.05)。在细胞层面，PD减少脂滴累积，改善脂质代谢，降低G0S2表达(P<0.05),增加ATGL表达(P<0.05)。即使在G0S2被敲低的细胞中，PD仍能促进脂肪分解(P<0.01)。结论 PD通过调节G0S2和ATGL表达促进肝脂肪分解，减轻高脂饮食诱导的小鼠NAFLD模型的代谢紊乱和肝脏损伤，为NAFLD治疗提供新策略。