2026年 08期
SAC1介导的巨噬细胞NLRP3炎症小体激活在MASH炎症进展中的作用
孙志阳;曹新旺;目的 探究SAC1样磷脂酰肌醇磷酸磷酸酶（SAC1）调控巨噬细胞核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体激活的分子机制及其在代谢功能障碍相关脂肪性肝炎（MASH）病理进程中的作用。方法 利用单细胞RNA测序（scRNA-seq）分析对照组和MASH小鼠肝脏巨噬细胞亚群中SACM1L的表达水平差异。分离并培养对照组和高脂饮食组小鼠骨髓来源巨噬细胞（BMDMs），通过RT-qPCR及Western blot检测SACM1L和NLRP3的表达水平。运用CRISPR/Cas9技术分别构建SACM1L敲除的THP-1巨噬细胞系和HeLa细胞系，比较野生型与SACM1L敲除THP-1细胞中p65磷酸化及NLRP3炎症小体的活化状态；运用免疫荧光实验评估野生型与SACM1L敲除的HeLa细胞中分散的反式高尔基体网络（dTGN）对NLRP3的空间募集能力。此外，通过给予小鼠10周含0.1%蛋氨酸的胆碱缺乏高脂饮食（CDA-HFD）建立MASH模型，比较对照组与MASH小鼠肝脏组织中SACM1L与NLRP3的表达水平。结果 生信分析与体内实验一致表明，SACM1L与NLRP3在MASH小鼠的肝脏组织及巨噬细胞中表达均显著上调。敲除SACM1L可减弱三棕榈酰化半胱氨酰丝氨酸四赖氨酸（Pam3CSK4）诱导的p-p65水平的升高，抑制NLRP3向dTGN的空间募集，降低下游Caspase-1和IL-1β的成熟与释放。结论 SAC1通过促进p65信号活化促进NLRP3的表达，影响NLRP3向dTGN募集，促进巨噬细胞炎症反应，进而加速MASH的病理进程。
一种基于DAP12胞内域的靶向GD2 CAR THP-1细胞系的构建
邱佳琪;朱梦娟;陈欣蕾;周路程;王帅;陈义昭;林宁;涂佳杰;目的 获得一种靶向双唾液酸神经节苷脂（GD2）、并含有巨噬细胞特异性激活信号接头蛋白DNAX激活蛋白12(DAP12)胞内域的嵌合抗原受体巨噬细胞（CAR-M）。方法 设计并合成以DAP12胞内域为信号模块、靶向GD2的嵌合抗原受体（CAR）分子[Anti-GD2 CAR(DAP12)]，并将其克隆至腺病毒载体中。用该病毒感染经佛波酯（PMA）诱导分化的THP-1巨噬细胞，构建含有绿色荧光标记的Anti-GD2 CAR THP-1。通过活细胞工作站检测CAR分子的表达情况，并通过体外共培养实验，检测空载体组、分化簇3ζ链（CD3ζ）组和DAP12组对GD2高表达（T98G）及低表达（U251）胶质瘤细胞的吞噬功能。结果 CAR腺病毒高效率转染THP-1-M，获得Anti-GD2 CAR-M。与胶质瘤细胞共培养后，流式细胞术结果显示，与Empty组相比，Anti-GD2 CAR-M(CD3ζ)组表现出增强的吞噬作用（P<0.05）；与Anti-GD2 CAR-M(CD3ζ)组相比，Anti-GD2 CAR-M(DAP12)组对GD2高表达的T98G细胞吞噬能力进一步增强（P<0.05）。结论 通过构建Anti-GD2 CAR(DAP12)腺病毒并转染经PMA诱导分化的THP-1巨噬细胞，成功构建了靶向Anti-GD2 CAR-M(DAP12)，且其能通过特异性靶向吞噬GD2高表达胶质瘤细胞。
SARS-CoV与SARS-CoV-2 NP蛋白同宿主蛋白互作差异的分析
李欣奕;孙绿茵;马竹萍;李永刚;陶晓莉;目的 通过比较严重急性呼吸综合征冠状病毒核衣壳蛋白（SARS-CoV-NP）和新型冠状病毒核衣壳蛋白（SARS-CoV-2-NP）与宿主蛋白互作差异，筛选出特异性差异蛋白，从蛋白质水平分析两者致病性差异。方法 蛋白下拉实验（pull-down）实验筛选与SARS-CoV-NP或SARS-CoV-2-NP相互作用的Vero细胞内的全部蛋白，质谱技术对筛选出的蛋白进行定性定量分析、蛋白功能注释和构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络。结果 数据库检索得到1 345个蛋白。差异性分析显示，SARSCoV-NP组与SARS-CoV-2-NP组相比，下调差异蛋白数目为358个，上调差异蛋白数目为476个。生信分析显示，这些蛋白主要定位于细胞质和细胞核中，参与生物过程调控、代谢过程的调节等生物过程，发挥着离子结合、核苷酸结合和碳水化合物衍生物结合等分子功能，与新陈代谢和遗传信息处理等相关疾病的发生和发展密切相关，普遍含有RNA识别基序，色氨酸-天冬氨酸重复序列（WD）域等功能性结构域。结论 SARS-CoV-NP组与SARS-CoV-2-NP组相比，存在多个差异宿主蛋白，为新型冠状病毒致病的分子机制和治疗靶点的研究提供了依据。
盐酸小檗碱对幽门螺杆菌及其生物膜脲酶基因ureA、ureB表达的影响
罗婷婷;李梦沁;杨雪;王菲;陈峥宏;罗成;綦廷娜;刘琦;目的 体外探究盐酸小檗碱对幽门螺杆菌（H. pylori）及其生物膜脲酶基因ureA和ureB表达的影响。方法 复苏本实验室保存的H. pylori的标准菌株26695和4株临床分离来源的H. pylori耐药株H390、e660、H57、H389；通过肉汤稀释法测定盐酸小檗碱对上述5株H. pylori的浮游菌的最低抑菌浓度（MIC）；通过棋盘格法测定盐酸小檗碱与阿莫西林对上述4株临床耐药的H. pylori的联合抑菌作用；通过肉汤稀释法测定盐酸小檗碱对26695和H390菌株的生物膜的MIC；将0.5MIC、MIC、2MIC盐酸小檗碱浓度分别与上述26695和H390菌株的H. pylori的浮游菌及生物膜共孵育2、8、24 h，对其脲酶活性进行检测，并通过RT-qPCR检测ureA和ureB基因的表达情况。结果 盐酸小檗碱对抗生素敏感菌株26695和耐药株H390、e660、H57、H389的浮游菌具有抑制作用，且对26695和H390菌株的生物膜均具有抑制作用；盐酸小檗碱与阿莫西林对H. pylori的耐药菌株的联合抑菌作用为协同或相加作用；盐酸小檗碱可抑制上述26695和H390这2株H. pylori的浮游菌及生物膜脲酶活性；盐酸小檗碱可下调H. pylori浮游菌及生物膜的ureA、ureB基因的相对表达量，ureA、ureB基因的相对表达量与盐酸小檗碱共孵育的时间及浓度均呈递减的关系（P<0.05）。结论 盐酸小檗碱对H. pylori浮游菌及生物膜具有抑制作用，与阿莫西林联用对H. pylori起相加或协同作用；此外，其通过抑制脲酶活性并下调H. pylori的ureA、ureB基因表达，从而减少该菌浮游菌及生物膜的生长。
富血小板纤维蛋白提取液对米非司酮诱导损伤的子宫内膜间质细胞的修复作用及其机制研究
邱萍;唐静;刘宇;刘慧;刘雅晴;陈仁杰;沈军;陈礼文;目的 探讨富血小板纤维蛋白（PRF）提取液对米非司酮诱导损伤的子宫内膜间质细胞（ESCs）的生物学修复功能及其分子机制。方法 采用米非司酮诱导建立ESCs损伤模型，将细胞分为未处理（Con）组、米非司酮损伤（M）组、米非司酮损伤+PRF-提取液处理（M+P）组及米非司酮损伤+PRF-提取液+生长因子抑制剂处理（M+P+T;M+P+Me;M+P+CJ）组。通过CCK-8法检测细胞活力，细胞划痕实验评估细胞迁移能力；ELISA检测PRF-提取液中血管内皮生长因子（VEGF）、血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)和转化生长因子-β1(TGF-β1)等生长因子的释放及其规律；RT-qPCR和Western blot分别分析ESCs中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3的mRNA与蛋白表达水平。结果 PRF-提取液中VEGF、PDGF-BB和TGF-β1均在2周内持续释放，释放高峰集中在第3～7天；PRF-提取液对米非司酮诱导损伤的ESCs细胞的增殖和迁移均有显著的修复能力（均P<0.000 1）;PRF-提取液能显著上调米非司酮诱导损伤ESCs细胞抗凋亡Bcl-2的mRNA和蛋白的表达（均P<0.000 1），并下调促凋亡蛋白Bax和Caspase-3的mRNA和蛋白的表达（均P<0.000 1）;VEGF、PDGF-BB、TGF-β1抑制剂（Tanshinone IIA、Methylnissolin、CJJ300）均显著逆转PRF-提取液对米非司酮诱导损伤的ESCs细胞的修复作用（均P<0.05）。结论 PRF-提取液可有效修复米非司酮诱导损伤的ESCs细胞，促进ESCs细胞增殖和迁移并调控细胞凋亡蛋白表达，VEGF、PDGF-BB、TGF-β1等细胞因子均参与该作用。
MIF/CD74轴对多发性骨髓瘤BCMA CAR-T耐药的潜在作用研究
陈新卓;吴凡;王会平;翟志敏;王芝涛;目的 探讨靶向B细胞成熟抗原（BCMA）的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）治疗前后多发性骨髓瘤（MM）肿瘤细胞的分子特征变化，分析不变链（CD74）表达改变及其与巨噬细胞迁移抑制因子（MIF）的潜在关联。方法 纳入BCMA CAR-T输注前及输注后≥3个月的骨髓配对样本，在恶性浆细胞相关群体中开展差异表达分析并进行功能富集和细胞通讯分析。以U266细胞系为模型进行共培养实验及MIF刺激实验，并采用CCK-8与EdU实验检测其细胞增殖能力。结果 治疗后3个月及以上的MM细胞出现CD74表达上调，且4对样本治疗后CD74表达均高于治疗前。治疗后整体上调基因主要涉及抗原加工与递呈、细胞黏附及免疫相关过程，且存在以MIF相关轴为代表的显著互作信号。体外实验显示，共培养条件下肿瘤细胞膜CD74增加，MIF刺激可促进U266细胞增殖。结论 BCMA CAR-T治疗后MM肿瘤相关细胞CD74表达上调，并伴随MIF/CD74激活，值得进一步深入研究其在治疗后适应性改变中的作用及潜在干预价值。
YB1介导MDR1调控肝内胆管细胞癌顺铂诱导耐药机制研究
王思琦;程淼;罗欣语;刘衡;目的 探讨Y-盒结合蛋白1(YB1)介导多药耐药基因1(MDR1)表达，从而调控肝内胆管细胞癌（ICC）顺铂诱导耐药性产生的机制。方法 在不同浓度的顺铂处理人ICC细胞HCCC-9810后，采用Western blot和免疫荧光技术检测YB1和磷酸化YB1(pYB1)的表达及其细胞定位的变化，并通过qPCR和Western blot方法分析耐药相关蛋白MDR1、多药耐药相关蛋白2(MRP2)和主要穹隆体蛋白（MVP）的表达变化。使用siRNA敲低HCCC-9810中YB1表达后，通过MTT检测其对顺铂和吉西他滨药物敏感性变化，并使用Western blot检测MDR1、MRP2和MVP表达变化。染色质免疫沉淀分析检测顺铂干预前后HCCC-9810细胞中YB1和MDR1启动子结合情况。通过亚硫酸氢盐测序检测顺铂干预前后HCCC-9810细胞MDR1启动子胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤（CpG）岛甲基化情况。结果 HCCC-9810细胞经顺铂干预后，胞内YB1蛋白总量并没有改变，但pYB1水平逐渐升高，同时伴随YB1和pYB1的核迁移。HCCC-9810细胞经顺铂诱导后，MDR1表达量显著提高，细胞耐药性增加；若预先抑制MDR1表达，则能够逆转细胞耐药性增加。同样，敲低HCCC-9810中YB1表达后，YB1和pYB1蛋白核迁移量显著减少，且MDR1表达量显著下降，对顺铂化疗敏感性显著增加。HCCC-9810细胞未受外界刺激时，MDR1启动子区域CpG岛呈高甲基化状态，抑制包括YB1在内的多种转录因子结合。当HCCC-9810细胞受顺铂干预后，MDR1启动子区域CpG岛发生去甲基化，继而胞核内YB1与MDR1启动子结合力增强，激活MDR1基因表达。结论 YB1高表达于ICC细胞质中，顺铂化疗诱导YB1核转位，同时伴随MDR1启动子CpG岛去甲基化，核YB1结合MDR1启动子并激活转录，最终导致化疗耐药性产生。
MEHP对小鼠肝细胞AML12和人肝癌细胞HepG2的细胞毒性效应研究
王浩泽;柏楠;俞军;王建青;目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)在体内的代谢物邻苯二甲酸单二乙基酯(MEHP)对小鼠正常肝细胞AML12和人肝癌细胞HepG2的毒性效应，并初步探讨其作用机制。方法 体外培养AML12，分成对照组和MEHP模型组，MEHP模型组分为200、400、800μmol/L三种不同浓度。通过RT-qPCR、Western blot等方法检测细胞形态、细胞活力、凋亡、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)以及与凋亡有关的因子mRNA表达水平，观察细胞形态。结果 随着MEHP的浓度增加，细胞活性明显出现抑制，半数抑制浓度(IC50)约为393μmol/L；与对照组相比，模型组的ROS水平明显增加(P<0.001)，且SOD活性有所下降，MDA表达显著性上升(P<0.001)；与对照组相比，抑制凋亡因子bcl-2表达水平降低，促凋亡相关因子(bax、caspase3等)表达增加(P<0.001)，且相关炎症因子(IL-1、IL-6、TNF-α)表达水平显著上升。结论 MEHP诱导肝脏细胞损伤与细胞凋亡、氧化应激相关，这对研究MEHP致肝损伤的机制具有重要意义。
ZNF473通过PI3K/AKT/c-Myc通路促进肝细胞癌的增殖与迁移
刘闯;任益凡;王妍;徐钧;目的 探讨锌指蛋白家族成员锌指蛋白473(ZNF473)对肝细胞癌（LIHC）增殖、迁移的影响及潜在作用机制。方法 通过癌症基因组图谱（TCGA）数据库分析ZNF473在泛癌、LIHC组织与正常组织中的表达水平；通过Kaplan Meier Plotter数据库Log-rank检验分析ZNF473对LIHC患者预后影响；以HepG2、MHCC97-H细胞为研究对象，分阴性对照组（NC）和实验组（siZNF473），在HepG2、MHCC97-H中转染ZNF473干扰载体，采用CCK-8、Transwell实验及划痕愈合实验检测ZNF473对HepG2、MHCC97-H细胞增殖和迁移的影响；采用Western blot检测敲低ZNF473后LIHC细胞中磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、c-Myc蛋白、蛋白激酶B(AKT)等蛋白表达的变化。细胞实验所有数据均使用GraphPad Prism 9.0软件进行分析。结果 TCGA数据库分析结果显示，ZNF473在包括LIHC在内的17种癌症中高表达。人蛋白图谱（HPA）数据库中的免疫组织化学（IHC）染色提示，ZNF473在LIHC组织中高表达。单细胞测序数据分析显示，ZNF473在恶性细胞亚群中的表达量高于其他细胞亚群。Kaplan-Meier Plotter数据库对LIHC患者的生存分析显示，ZNF473高表达组的总生存期（OS）、疾病特异性生存期（DSS）、无进展生存期（PFS）及无复发生存期（RFS）均显著短于低表达组。CCK-8实验表明敲低ZNF473后，HepG2、MHCC97-H细胞增殖能力下降；划痕愈合实验和Transwell实验结果显示，敲低ZNF473后HepG2、MHCC97-H细胞迁移能力下降。RT-qPCR结果显示，si-ZNF473组磷酸酶与张力蛋白同源物（PTEN）相对表达量差异无统计学意义，磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸3-激酶催化亚基α(PIK3CA)、磷酸肌醇-3-激酶调节亚基1(PIK3R1)表达差异有统计学意义（P<0.05）。Western blot结果显示，下调ZNF473表达后p-AKT、c-Myc蛋白表达水平下降（P<0.05）。结论 ZNF473在LIHC细胞和组织中呈高表达，ZNF473表达可能通过调控PI3K/AKT/c-Myc通路促进LIHC细胞增殖、迁移。
犬尿氨酸-3-单加氧酶对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞功能的影响
贾永平;宗雪梅;汪艳楠;汪文莉;王越业;魏伟;常艳;目的 探讨犬尿氨酸-3-单加氧酶（KMO）对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）功能的影响。方法 通过生物信息学分析RA和健康对照（HC）组滑膜组织KMO表达；收集RA患者和HC滑膜组织，免疫荧光（IF）检测滑膜组织FLS中KMO表达情况；体外利用人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（MH7A），对MH7A进行过表达、敲低及KMO特异性抑制剂Ro61-8048抑制KMO后，通过Western blot、CCK-8、EdU、Transwell和ELISA等方法检测MH7A细胞活力、增殖、迁移及分泌功能的变化。结果 生物信息学分析表明，RA滑膜组织KMO基因表达显著高于HC组（P<0.001）;IF结果显示，与HC组相比，RA滑膜组织FLS中KMO表达增加（P<0.01）；过表达KMO后，MH7A细胞活力、增殖、迁移和分泌能力增强（均P<0.05）;MH7A细胞敲低和Ro61-8048抑制KMO后，MH7A细胞活力、增殖、迁移和分泌能力受到显著抑制（均P<0.05）。结论 KMO在RA滑膜组织中表达上调，并促进RA-FLS活化，可能是RA治疗的潜在靶点。
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