2025年 02期
长链非编码RNA LUCAT1调控胰腺癌MIA PaCa-2细胞恶性机制研究
叶梦洁;瞿薇薇;骆广涛;目的 探究长链非编码RNA(lncRNA)LUCAT1对人胰腺癌细胞MIA PaCa-2生物学行为的影响，探讨LUCAT1在胰腺癌恶性进展中的潜在作用。方法 在线数据库GEPIA分析LUCAT1在胰腺癌中的突变及表达情况；q-PCR实验检测对比人胰腺导管细胞HPNE及人胰腺癌细胞中LUCAT1的表达水平；FISH检测人胰腺癌组织中LUCAT1表达及分布。CCK-8实验和Transwell实验检测LUCAT1对MIA PaCa-2细胞增殖、凋亡、耐药及迁移能力的影响。基因集合富集分析比对LUCAT1参与的相关信号通路，Western blot实验验证蛋白质表达水平。结果 GEPIA分析结果显示，LUCAT1在人胰腺癌组织中表达水平上调；q-PCR实验结果显示，人胰腺癌细胞中LUCAT1高表达，差异有统计学意义(P<0.05)。敲低及过表达LUCAT1可影响胰腺癌细胞增殖、凋亡、吉西他滨耐药性以及迁移和侵袭能力(P<0.05)。在胰腺癌中LUCAT1影响p-Akt表达水平，并在Akt抑制剂MK-2206处理后相关功能被抑制。结论 LUCAT1通过PI3K-Akt信号通路调控胰腺癌细胞MIA PaCa-2恶性进展。
格氏乳球菌SHAMU-LG6对葡萄球菌的拮抗活性研究
翁胜男;冷贵云;刘颖;王亚武;李昕;姚杰;周强;唐伟;目的 探索格氏乳球菌SHAMU-LG6对葡萄球菌的拮抗活性。方法 利用VITEK 2 GP鉴定卡、Microflex LT MALDI-TOF质谱分析仪和16S rDNA扩增测序3种方法共同鉴定菌株种属。牛津杯法抑菌试验检测格氏乳球菌SHAMU-LG6对不同葡萄球菌的拮抗活性；XAD16非离子型大孔树脂吸附、梯度乙醇洗脱和旋转蒸发干燥初步分离纯化抗菌活性成分。结果 格氏乳球菌SHAMU-LG6对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、路邓葡萄球菌、人葡萄球菌、头状葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等均具有拮抗效应，抑菌指数分别为3.3、3.0、4.3、2.0、4.0、3.5、3.8和3.5。格氏乳球菌SHAMU-LG6分泌的抗菌活性成分主要存在于70%和80%乙醇洗脱物中。结论 格氏乳球菌SHAMU-LG6对葡萄球菌具有强拮抗效应，其分泌的抗菌活性成分有望成为新型抗菌药物开发的先导化合物。
大蒜新素纳米缓释颗粒的制备及其对下肢缺血保护作用的实验研究
欧阳欢;刘博;刘逸;查斌山;丁洋;胡先宇;陈智勇;目的 制备负载大蒜新素——二烯丙基三硫化物(DATS)的中空介孔硅纳米微球(HMSNs),并研究其作为下肢缺血性损伤治疗剂的可行性。方法 采用选择性蚀刻法合成出HMSNs,同时利用扫描和透射电镜观察微观结构，X射线衍射和动态光散射(DLS)分析理化性质，红细胞溶血实验和细胞毒性实验测试生物安全性。采用吸附法将DATS负载至HMSNs里，获得缓释DATS的纳米颗粒(DATS-HMSNs),并用紫外分光光度法计算并制作DATS的累积释放曲线。将C57BL/6小鼠随机分为四组(假手术组、0.9%氯化钠注射液组、DATS组、DATS-HMSNs组),下肢缺血模型采用股动脉结扎切除法制作。测试各组小鼠肢体缺血前后的运动能力和肌肉内肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、单核细胞趋化蛋-1 (MCP-1)、活性氧(ROS)、血小板内皮细胞黏附分子(CD31)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和血管内皮生长因子(VEGF)含量的变化。结果 扫描和透射电镜观察可见制备出的HMSNs为中空的球形且粒径均一，DLS结果显示粒径为(226.5±11.8)nm。红细胞溶血实验及细胞毒性实验结果表明HMSNs具备良好的生物相容性。HMSNs对DATS的最大载药率为27.89%,7 d DATS的累积释放率80.12%,21 d可达到97.27%。与对照组比较，DATS-HMSNs用于下肢缺血小鼠后，免疫组化染色发现CD31、α-SMA、bFGF及VEGF的水平增高(P<0.05),ELISA实验发现TNF-α、IL-6、MCP-1和ROS的含量减低(P<0.05),并且缺血后小鼠运动能力恢复满意。结论 DATS-HMSNs可以缓慢、持续地释放DATS,为下肢缺血性损伤提供保护作用。
iNOS/IRS1/AKT/GSK-3β信号通路在慢性间歇低氧致胰岛素抵抗中的作用
靳美娜;周雪利;李海波;白炜;贾楚璇;高立;任丽珏;陈青宇;王瑞;李华;魏翠英;目的 对照观察慢性间歇低氧-复氧条件下大鼠肝脏病理改变和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、磷酸化胰岛素受体底物1丝氨酸307(p-IRS1ser 307)、磷酸化蛋白激酶B丝氨酸473(p-AKTser 473)、糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、糖原合酶(GS)蛋白的表达水平，探讨iNOS/IRS1/AKT/GSK-3β信号通路在慢性间歇低氧所致胰岛素抵抗中的作用。方法 将40只SD大鼠随机分为对照组(NC组)和实验组(CIH组),每组20只。NC组置于常氧环境12周，CIH组先予间歇低氧8周，随后恢复常氧饲养至第12周。两组均于基线、第8周、第12周分别测定空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)水平，并取肝脏组织进行病理检测和iNOS、p-IRS1ser 307、p-AKTser 473、GSK3β、GS水平测定，比较组间差异。结果 基线时，两组肝脏病理及各项观察指标间差异无统计学意义；8周时，与NC组比较，CIH组肝脏病理出现肝血窦和肝细胞索排列紊乱、肝细胞水肿、细胞核变小、淋巴细胞浸润增多并可见少量脂肪空泡，FBG、FINS、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、iNOS mRNA、p-IRS1ser 307蛋白、GSK-3β蛋白水平升高，p-AKTser 473蛋白、GS蛋白水平降低，差异均有统计学意义(均P<0.05);12周时，与NC组比较，CIH组未见淋巴细胞浸润，脂肪空泡增多，其它已发生的病理损伤无改善，p-AKTser 473蛋白水平升高，p-IRS1ser 307蛋白与GS蛋白水平降低，差异均有统计学意义(均P<0.05)。Pearson相关分析显示：8周时CIH组HOMA-IR与iNOS mRNA、p-IRS1ser 307蛋白、GSK-3β蛋白水平正相关(r=0.874,0.817,0.872;均P<0.05),与p-AKTser473蛋白、GS蛋白水平呈负相关(r=-0.886,-0.879;均P<0.05)。结论 慢性间歇低氧可以导致肝脏病理损害，即使复氧干预也不能逆转，并可能通过上调iNOS mRNA的表达，调控IRS1/AKT/GSK-3β信号通路，从而介导胰岛素抵抗的发生。
CD151通过囊泡内化再循环调控血管通透性的机制
范诗浪;蒋卢映;章子璇;季萌萌;左后娟;刘竞搏;目的 探究CD151通过调控囊泡内化再循环对血管通透性的影响及机制。方法 野生型小鼠和CD151敲除小鼠分别分为WT-con组、WT-模型组、KO-con组和KO-模型组，每组6只。WT-模型组和KO-模型组采用腹腔注射脂多糖(LPS)制备脓毒症急性肺损伤(ALI)模型，WT-con组和KO-con组腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)作为对照。造模后24 h,通过Miles实验测定肺血管通透性；将沉默CD151表达的siRNA(si-CD151)和阴性对照si-NC转入EA.hy 926细胞，分别观察基础条件及血管内皮生长因子(VEGF-A)刺激条件下，内皮细胞层在不同时间点对FITC-dextran的通透性；CD151敲低组和对照组内皮细胞行转录组测序；免疫荧光检测各组细胞CD151分布及内化；Western bolt及RT-qPCR检测CD151敲低组及对照组VE-cadherin表达情况，免疫荧光检测各组细胞VE-cadherin分布及内化。结果 Miles实验结果提示，WT-模型组小鼠肺组织中染料渗出相较WT-con组增加(P<0.01),KO-模型组小鼠肺组织中染料渗出相较WT-模型组增加(P<0.05)。内皮细胞层通透性检测结果提示，在VEGF-A刺激30、60和120 min后，CD151敲低组对FITC-dextran的通透性显著高于对照组(P<0.05)。转录组测序结果提示，内皮细胞中CD151与囊泡介导的转运存在密切关联。Western bolt和RT-qPCR结果提示，CD151敲低的内皮细胞中VE-cadherin在蛋白和mRNA水平表达较对照组显著下降(均P<0.01)。免疫荧光染色结果提示，在VEGF-A刺激后，与对照组比较，CD151表达下降显著破坏细胞-细胞连接处VE-cadherin的表达，降低了CD151和VE-cadherin在核周区域的共定位。结论 CD151的缺失影响内皮细胞囊泡内化再循环，影响VE-cadherin的表达与内化活动，进而影响血管通透性。
HIF-1α/BNIP3通路介导的糖酵解与氧诱导新生小鼠视网膜血管生成的关系
易燕;陈斐斐;谭赟;杜恒;目的 基于缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)/Bcl2/腺病毒E1B相互作用蛋白3(BNIP3)通路的糖酵解探讨氧诱导新生小鼠视网膜血管生成机制。方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分为常氧组、缺氧+si-NC组、缺氧+si-HIF-1α组和缺氧+si-HIF-1α+BNIP3组。常氧组HUVECs暴露于常氧(21%O_2)下培养。缺氧+si-NC组、缺氧+si-HIF-1α组和缺氧+si-HIF-1α+BNIP3组用si-NC、si-HIF-1α或si-HIF-1α联合BNIP3质粒处理HUVECs 36 h,然后暴露于缺氧(1%O_2)下培养。通过免疫荧光、代谢测量、细胞活力、划痕实验、管形成实验考察细胞线粒体自噬、糖酵解以及增殖、迁移和管形成情况。出生后第7天的C57BL/6J幼鼠随机分配到不同的治疗组：对照组、氧诱导视网膜病变(OIR)组、OIR+si-HIF-1α组和OIR+si-BNIP3组，测量新生血管形成和血管闭塞情况。结果 与常氧组比较，缺氧+si-NC组HUVECs中LC3+MitoTracker+斑点数、葡萄糖摄取和乳酸释放的速率增加(P<0.001)。与缺氧+si-NC组比较，缺氧+si-HIF-1α组HUVECs中LC3+MitoTracker+斑点数、葡萄糖摄取和乳酸释放的速率降低(P<0.01)。与常氧组比较，缺氧+si-NC组HUVECs在培养第72 h的增殖活性降低(P<0.05),并且伤口愈合面积和管形成数量增加(P<0.01)。与缺氧+si-NC组比较，缺氧+si-HIF-1α组HUVECs在培养第24、48、72小时的增殖活性降低(P<0.05),伤口愈合面积、管形成数量降低(P<0.001)。BNIP3的过表达逆转了HIF-1α敲低对线粒体自噬、糖酵解以及生物学功能的影响。与OIR组比较，OIR+si-HIF-1α组和OIR+si-BNIP3组小鼠的视网膜组织中新生血管形成和血管闭塞区域减少(P<0.05)。结论 HIF-1α/BNIP3信号通路在低氧条件下促进了HUVECs中线粒体自噬激活，其对于内皮功能和血管生成的调控有重要作用。
SDC2表达调控铁死亡参与宫颈癌发生的作用及机制
姚雪芹;肖雪莲;罗其英;常德萍;高燕;目的 探究黏结蛋白聚糖2(SDC2)是否可通过调控铁死亡影响宫颈癌细胞增殖、侵袭、迁移及其可能的作用机制。方法 培养正常宫颈上皮细胞H8、宫颈鳞状癌细胞C33A,分为H8组与C33A组。培养C33A细胞，分为对照组、低表达SDC2组、低表达SDC2+铁死亡抑制剂(ferrostation-1)组与低表达SDC2+铁死亡诱导剂(erastin)组。Western blot检测细胞中SDC2、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化酶4(GPX4)蛋白。RT-qPCR检测C33A细胞中SDC2 mRNA水平。ELISA试剂盒检测C33A细胞中活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、亚铁离子(Fe~(2+))水平。平板克隆检测C33A细胞克隆能力。划痕实验检测C33A细胞迁移能力。Transwell实验检测C33A细胞侵袭能力。结果 与H8组比较，C33A组细胞中SDC2、SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达增加(P<0.05)。与对照组比较，低表达SDC2组C33A细胞增殖、迁移及侵袭能力降低(P<0.05),C33A细胞中SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达减少(P<0.05),GSH水平减少，ROS及Fe~(2+)水平增加(P<0.05)。与低表达SDC2组比较，低表达SDC2+ferrostation-1组SLC7A11、GPX4蛋白及mRNA表达增加(P<0.05),GSH水平增加，ROS及Fe~(2+)水平减少(P<0.05)。与对照组比较，低表达SDC2+erastin组C33A细胞增殖、迁移及侵袭能力降低(P<0.05)。结论 SDC2在C33A宫颈癌细胞中表达增加，低表达SDC2可激活SLC7A11/GPX4通路介导的铁死亡，从而降低C33A细胞的增殖、侵袭及迁移能力。
PROS1基因多态性与包头地区汉族人群复发性流产的关联性
赵萍萍;吴涤;李得春;王艳国;目的 探究PROS1基因单核苷酸多态性(SNP)与包头地区汉族人群复发性流产(RSA)发生风险之间的相关性。方法 选取RSA患者及对照人群各158例作为研究对象，测定蛋白S、蛋白C、抗凝血酶-Ⅲ活性；使用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对PROS1基因rs13062355、rs6441600和rs12634349位点进行基因分型。采用非条件性Logistic回归分析PROS1基因三种SNP与RSA发生风险的相关性。结果 RSA患者的蛋白S、抗凝血酶-Ⅲ活性下降(P<0.05);PROS1 SNP rs13062355在显性模型下与RSA发病风险相关：与携带TT基因型患者比较，携带CT+CC基因型的患者RSA发病风险下降(OR=0.398,95%CI:0.249～0.638)。SNP rs6441600、rs12634349与RSA的发病风险无关联。在PROS1 rs13062355、rs6441600、rs12634349构建的单体型中，单体型C-C-C在两组间差异有统计学意义(P<0.05);三阶交互模型rs13062355-rs6441600-rs12634349与RSA发病风险相关。结论 PROS1 SNP rs13062355可能与包头地区汉族女性RSA患病风险相关；PROS1 rs13062355、rs6441600、rs12634349的单体型C-C-C降低了RSA发病风险；三阶模型rs13062355-rs6441600-rs12634349的交互作用在RSA的发生中具有协同效应。
BRD4通过HMGB1/TGF-β1/Smad通路参与调控肺泡上皮细胞间质转化
陈茹茹;韩璐;何海兰;郝小惠;刘和亮;郭灵丽;目的 探究溴结构域蛋白4(BRD4)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转化中的作用机制。方法 采用不同浓度(5、10 ng/ml)的TGF-β1刺激MLE-12细胞48 h建立上皮间质转化(EMT)细胞模型，并对细胞予以50 nmol/L BRD4抑制剂JQ-1,100μmol/L高迁移率族蛋白B1(HMGB1)抑制剂甘草甜素(GA)和3μg/ml的重组高迁移率族蛋白1(rHMGB1)预处理。实验分组为：对照组、TGF-β1组、JQ-1组、JQ-1+TGF-β1组、GA组、GA+TGF-β1组、JQ-1+TGF-β1+rHMGB1组。采用CCK-8法检测JQ-1对细胞活力的影响；采用Western blot检测CDH1、ZO-1、Vimentin、α-SMA、BRD4、HMGB1、TGF-β1及Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达水平；通过划痕实验检测细胞迁移能力。结果 与对照组比较，TGF-β1组Vimentin、α-SMA蛋白表达增加，CDH1和ZO-1蛋白表达降低，提示EMT模型构建成功。在该模型中，BRD4、HMGB1的表达明显增加。不同浓度的JQ-1均可抑制MLE-12的细胞活力，且呈浓度依赖性。JQ-1和GA均可缓解TGF-β1诱导的EMT的发生，并抑制由TGF-β1引起的HMGB1表达的增加和TGF-β1/Smad2/3通路的激活，而采用rHMGB1上调HMGB1的表达可以减少JQ-1对EMT和TGF-β1/Smad2/3通路的影响。此外，JQ-1和GA均可以有效降低TGF-β1诱导的细胞迁移；而rHMGB1可以缓解JQ-1对细胞迁移速率的抑制作用。结论 BRD4可通过影响HMGB1/TGF-β1/Smad2/3信号通路调控肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质转化过程，且BRD4可能成为抑制肺纤维化的一个潜在靶点。
动物双歧杆菌B4株的全基因组测序及其益生特性分析
丁瑞培;刘承忠;史灿灿;张慧玉;代宜萍;穆如雪;李子龙;何茂章;李卓君;目的 分析由健康人粪便中新分离出的一株动物双歧杆菌B4株的全基因组信息，并探究其益生特性。方法 采用体外实验方法对动物双歧杆菌B4的耐药性、溶血性、耐胃酸特性以及生化特性进行评估，并利用二代+三代测序技术对该菌进行全基因组测序以及基因功能注释。结果 经全基因组测序后显示该动物双歧杆菌B4株基因组大小为1 944 146 bp, GC含量为60.49%,不含质粒，总基因数为1 642个。体外实验分析结果显示，该动物双歧杆菌B4株具有良好的益生特性，包括非溶血性和耐胃酸的特性。同时基因组结果显示，该动物双歧杆菌B4株不具有毒素、致病相关基因，耐药基因少且传播能力不高，具有很高的安全性。通过KEGG、COG、GO等基因注释显示其含有很多生物活性酶，如β-半乳糖苷酶、L-乳酸脱氢酶等益生基因。结论 该动物双歧杆菌B4株具有良好的益生特性，在基因层面上展示了优良的安全性，具有益生特性的基因序列。