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p62基因过表达慢病毒载体的构建及表达
张春;苏丛;伍婷;朱立雨;目的 构建p62基因过表达慢病毒载体及其表达系统，并在人单核细胞白血病细胞(THP-1)中稳定表达，为在细胞水平研究p62基因的作用提供途径与方法。方法 采用聚合酶链式反应(PCR)扩增p62基因片段，将扩增产物连接至线性化pcDNA3.1-Flag-PCDH10真核表达慢病毒载体；PCR鉴定重组质粒，将构建成功的重组质粒和包装质粒共转染至人胚胎肾细胞293(HEK 293T);用重组慢病毒感染人单核细胞白血病(THP-1)细胞，氨苄霉素筛选阳性细胞克隆株；Western blot和实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测高表达p62基因的THP-1细胞株(过表达组)和转染不含p62基因空质粒(对照组)的THP-1细胞株；感染肺炎克雷伯菌(Klebsiella Pneumoniae,K.p.)后，RT-qPCR检测THP-1细胞中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β和趋化因子1(Cxcl1)表达水平。结果 通过PCR成功获得p62基因片段并连接到pcDNA3.1-Flag-PCDH10病毒载体上，并且PCR检测显示p62-pcDNA3.1-Flag-PCDH10重组质粒构建成功；挑选慢病毒感染THP-1细胞后抗氨苄青霉素细胞株，Western blot检测结果显示药筛存活的THP-1细胞较对照组细胞P62蛋白表达增多(P<0.001),且RT-qPCR检测显示p62 mRNA表达增高(P<0.001),说明成功构建高表达P62蛋白的THP-1细胞株；感染K.p.后，高表达P62的THP-1细胞中TNF-α、IL-1β和Cxcl1表达水平增高(P<0.01)。结论 经三质粒包装系统可以成功构建p62-pcDNA3.1-Flag-PCDH10慢病毒载体及高表达P62蛋白THP-1细胞株，为后续p62基因的研究提供了基础。
中学生网络有害使用影响因素多元逐步回归分析
谢雯,李晓驷,沈怡芳,方冬玲,张晓庆,马曙辉,田敏华,陈红星,曹静,夏海森,蔡春岚,钟慧目的对中学生的网络成瘾情况及其影响因素进行探讨。方法采取系统分层随机抽样的方法,选取合肥市不同类型6所中学的2010名学生为研究对象。有效问卷为1949份,占总样本的0.9697。以《网络成瘾测验》自评量表、自行设计的“背景调查表”为工具。结果网络可能成瘾者68人,占所有受试者的0.035;多元逐步回归分析结果表明:男生、与父亲或母亲关系欠融洽、家中有电脑、借读生、主观感到学校生活单调等因素对网络可能成瘾有较强的预测作用。结论导致中学生网络成瘾的因素来自家庭、学校以及社会环境等多方面。
多维度共情测验的编制及信效度分析
朱玉;陈新贵;吴小玲;许胜;曹召伦;汪凯;张蕾;目的编制多维度共情测验(MET)并检测其信效度。方法根据共情的理论研究,以文献研究为基础,结合我国研究共情的现状,经专家小组讨论和甄选编制出最初版本的MET。选取安徽省某高校在校大学生601例进行评估施测,采用中文版人际指针IRI-C量表作为效标,选取84例被试间隔4周后重测,采用SPSS 22.0软件进行统计学分析。结果 MET测验由40张贴近生活的各种不同情绪图片组成,其中20张积极图片(男10例,女10例),20张消极图片(男10例,女10例)。MET测验的每一个项目得分与题目总分相关,相关系数介于0.1890.735(P<0.01),同时,MET每一项目均具有较好的区分度(P<0.001)。MET认知共情维度、情感共情维度的Cronbach'sα系数分别为0.714、0.953,重测信度分别为0.846、0.802,分半信度介于0.6300.926;MET的认知共情维度与中文版人际指针IRIC的观点采择因子相关(r=0.140,P<0.01),情感共情维度与IRI-C的共情性关心因子存在相关性(r=0.157,P<0.01)。结论 MET具有较好的信效度,适合中国人群使用,并能很好地区分认知共情和情感共情。
免疫共沉淀联合质谱分析筛选克罗恩病中Intelectin-1相互作用蛋白的初步研究
顾问;周郑;吴文涌;刘晓昌;余昌俊;目的对比克罗恩病患者的病变与正常肠黏膜,筛选与肠凝集素-1(Intelectin-1)相互作用的差异蛋白,探讨Intelectin-1及其相互作用蛋白在克罗恩病发展中的作用。方法利用免疫共沉淀技术筛选克罗恩病患者病变及正常组织中与Intelectin-1相互作用的蛋白;利用MALDI-TOF/TOFMS质谱分析技术鉴定与Intelectin-1相互作用蛋白;并使用免疫共沉淀和Western blot分析技术验证所鉴定的Intelectin-1相互作用蛋白。结果利用免疫共沉淀联合质谱分析技术成功筛选出4个与Intelectin-1相互作用差异蛋白,包括:肿瘤坏死因子受体相关因子3(TRAF3)、腺苷酸三磷酸酶(ATPase)、热休克蛋白90(HSP90)、锌指蛋白(ZNF)。结论Intelectin-1可能通过与TRAF3、ATPase、HSP90、ZNF蛋白相互作用,而影响克罗恩病的发展。
乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测模型构建
李雪;常文千;崇英之;王依泽;邵苗苗;刘越;刘韩熠珈;裴盛斐;杨璐铭;吴冬雪;王雪;耿雪倩;赵贺贺;薛扬;冯福民;景丽伟;目的通过收集乳腺癌患者化疗期间的各项临床数据,发现乳腺癌患者化疗时导致肝功能异常的影响因素,并建立风险预测模型。方法对入院的乳腺癌患者进行流行病学问卷调查、临床生化检测和血样标本的收集,并分析乳腺癌患者化疗期间的年龄、肿瘤分型、肿瘤TNM分期、化疗方案等数据,使用决策树构建乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测模型。采用EpiData 3.0建立数据库,R软件进行统计分析。结果共收治675例乳腺癌患者,均为女性。按照研究对象的纳入与排除标准,发现人口学信息、临床生化指标以及血样标本均收集完整的乳腺癌患者640例。经化疗后,106例乳腺癌患者发生肝损伤,占比16.56%。60～80岁年龄组发生药物性肝损伤的患者比例(22.82%)高于其他年龄组,且肝损伤的发生率随着年龄的增加呈上升趋势(P<0.05)。已绝经的乳腺癌患者及有长期服药史的乳腺癌患者发生肝损伤的比例分别为21.17%和17.32%,高于未绝经和无长期服药史的肝损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤病理学分型、肿瘤TNM分期及化疗方案均与乳腺癌患者药物性肝损伤发生率相关,其中化疗方案中联合用药组的肝损伤发生率为20.67%,明显高于其他药物组别,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌化疗药物性肝损伤风险的决策树模型筛选出3个预测肝损伤风险的观测指标为年龄、肿瘤TNM分期和联合用药,这三个指标对乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测的正确率为92.19%,其中灵敏度和特异度分别为86.36%和93.40%。结论年龄、是否绝经、长期服药史、肿瘤病理学分型、肿瘤TNM分期及化疗方案是乳腺癌患者化疗期间发生肝损伤的影响因素。结合以上影响因素建立了乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测模型,从而实现患者个体化治疗,保障乳腺癌患者化疗顺利进行。
2型糖尿病大鼠模型的建立与评价
孙俊英;郭延云;陈丽;章秋;邹宇宏;李俊;目的建立类似人类2型糖尿病大鼠模型。方法♂大鼠90只,随机取20只为对照组,70只为高脂组。在脂肪乳灌胃5个月后行高胰岛素-正常血糖钳夹实验,测体重、收缩期血压、空腹血糖、空腹胰岛素、甘油三酯。高脂组(62只)大鼠腹腔注射小剂量链脲佐菌素和弗氏完全佐剂每周一次至造模成功。结果①5个月后,高脂组体重、收缩压、血清甘油三酯较对照组显著升高(P<0.05),空腹胰岛素明显升高,胰岛素敏感指数明显下降,差异有显著性(P<0.05)。②高脂组葡萄糖灌流速度较对照组下降,差异有显著性(P<0.05)。结论长期高脂饮食结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素和弗氏完全佐剂成功复制出实验性2型糖尿病大鼠模型。
肌少症与绝经后2型糖尿病患者骨质疏松的相关性研究
张萍;杜益君;王跃;王艳秋;徐小群;潘天荣;目的 探讨绝经后2型糖尿病(T2DM)患者四肢骨骼肌质量指数(ASMI)与骨质疏松(OP)的相关性。方法 选取164例住院绝经后老年T2DM患者，双能X线吸收法(DXA)测定骨密度(BMD)及四肢骨骼肌肌肉质量，ASMI=四肢骨骼肌肌肉质量/身高2(kg/m2),按T值分为OP组和非OP组，比较两组患者一般资料、生化指标及ASMI并进行Logistic回归、受试者工作特征曲线(ROC)分析。结果 与非OP组比较，OP组肌少症(SAC)患病率高(P<0.05);两组年龄、ASMI、体质指数(BMI)、雌二醇(E2)比较，差异有统计学意义(P<0.05);Logistic回归分析显示ASMI[OR=0.133,95%CI(0.029～0.611)]、BMI[OR=0.785,95%CI(0.625～0.985)]、E2[OR=0.967, 95%CI(0.942～0.993)]是OP的保护因素。ROC曲线提示，ASMI对OP患病预测的曲线下面积为0.752[95%CI(0.632～0.872),P<0.001],敏感性为87.5%,特异性为47.8%,最佳诊断值为5.52 kg/m2。结论 ASMI、BMI、E2减少与OP发生呈正相关，ASMI是OP的重要保护因素，对老年绝经后T2DM患者应早期进行OP筛查及危险因素评估，尽早采取干预措施，降低跌倒、骨折的发生风险。
白藜芦醇抑制PI3K/AKT通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的作用研究
范懿隽;史于传;李君;董振;詹磊;目的 探究白藜芦醇促进子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬的作用机制。方法 Ishikawa细胞分为对照组、白藜芦醇组和白藜芦醇+PI3K激动剂(740Y-P)组。用qRT-PCR和Western blot法检测LC3、Beclin1、PI3K和AKT的表达水平，用细胞免疫荧光法检测LC3的表达强度，用电镜观察细胞的自噬情况。结果 白藜芦醇可增加细胞的Beclin1和LC3 mRNA(P<0.05,P<0.01)及蛋白水平(均P<0.01);细胞质LC3红色荧光强度增强；自噬小体数量增加。白藜芦醇组Ishikawa细胞P-PI3K(P=0.017)和P-AKT(P=0.025)蛋白水平低于对照组，而白藜芦醇+740Y-P组自噬水平相对于白藜芦醇组有所下降(P<0.01)。结论 白藜芦醇可能是通过抑制PI3K/AKT通路诱导子宫内膜癌Ishikawa细胞自噬，从而抑制细胞增殖。白藜芦醇可能成为子宫内膜癌辅助治疗的新药物。
红花椒提取物和青花椒提取物对慢性束缚应激小鼠的抗抑郁作用
谭邦银;于浩飞;谢建平;张素婷;王晶;尹文耀;丁彩凤;张荣平;郭英;张兰春;目的 研究红花椒提取物和青花椒提取物对慢性束缚应激抑郁模型小鼠的抗抑郁作用。方法 45只SPF级雄性ICR小鼠，随机分成5组，即正常组、模型组、盐酸舍曲林组、红花椒提取物组和青花椒提取物组，每组9只。除正常组外，其他组小鼠用慢性束缚应激复制小鼠抑郁模型。在正常组和模型组经灌胃给予橄榄油，其他组依次给予盐酸舍曲林(10 mg/kg)、红花椒提取物(200 mg/kg)和青花椒提取物(200 mg/kg)治疗后，以旷场实验、强迫游泳实验评价各组小鼠抑郁行为，ELISA法测定小鼠血清和皮层脑源性神经营养因子(BDNF)、5-羟色胺(5-HT)、谷胱甘肽(GSH)及血清和脑组织一氧化氮(NO)的水平。结果 与模型组相比，红花椒提取物能降低小鼠强迫游泳的不动时间百分比，增加皮层BDNF水平，改善皮层和血清5-HT、GSH水平，差异均有统计学意义(P <0.05);青花椒提取物能改善小鼠旷场实验及强迫游泳中的行为，增加皮层5-HT和血清GSH水平，降低血清和皮层NO的含量。结论 红花椒提取物和青花椒提取物均能改善慢性束缚应激小鼠的抑郁样行为。
持续光照建立斑马鱼失眠模型及评价
冉思邈;夏婧;夏乐旋;王平;目的 利用斑马鱼建立睡眠剥夺模型，为失眠的基础研究提供更多可靠的实用建模参考方案。方法 选取4月龄同一批次野生型AB系雄性斑马鱼160尾作为实验对象，随机分为对照组(CK组)和睡眠剥夺1～7 d组(SD1～SD7组)。对照组置于正常14 h/10 h明/暗交替环境，睡眠剥夺组分别利用模拟日光对其进行不同时间的持续光照达到剥夺斑马鱼睡眠的效果。造模结束后，比较各组斑马鱼运动形式、学习记忆能力、生物钟基因表达、脑部超微结构的改变。结果 运动形式结果显示：与CK组斑马鱼相比，SD1、SD2、SD3组斑马鱼静息时间均增多(P<0.05),SD3组斑马鱼大运动时间及大运动计数较CK组减少(P<0.05);学习记忆能力结果显示：CK组斑马鱼学习记忆能力较SD1、SD2、SD3组强，(P<0.05、0.01),SD1组斑马鱼学习记忆能力较SD2、SD3组斑马鱼强(均P<0.01),SD2组斑马鱼学习记忆能力较SD3组斑马鱼强(P<0.01);qRT-PCR结果显示：与CK组相比，SD3组斑马鱼脑部周期蛋白1a(Per1a)、周期蛋白2(Per2)、脑和肌肉组织芳香烃受体核转运蛋白的类似蛋白1(Bmal1)、隐色素1b(Cry1b) mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)；电镜结果显示：SD2及SD3组斑马鱼大脑神经元出现神经元坏死现象，镜下可见细胞核塌陷，边界破裂甚至溶解，核染色质固缩，线粒体出现肿胀，甚至大量空泡。结论持续光照3 d可改变斑马鱼运动形式，使其学习记忆能力下降，改变了与睡眠相关的时钟基因表达，诱发了脑部神经元凋亡，可以用来建立斑马鱼失眠模型。