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小鼠骨髓间充质干细胞的稳定高效培养及外泌体的提取
程欢;苏盖;陶思跃;尤涛;目的建立稳定、高效的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)培养及外泌体提取方法。方法通过全骨髓、差速贴壁并辅助以低氧(5%O2)环境的方法进行小鼠BM-MSCs培养,收集细胞,鉴定干细胞表面标志物,进行成骨、成脂及成软骨诱导;并收集上清液,超速分离的方法提取外泌体后鉴定。结果小鼠BM-MSCs生长状态好,第3代细胞就可达到95%以上的纯度且可稳定传代至15代左右,表达间充质干细胞(MSCs)标志物,且可被成功诱导分化成骨、成脂肪及软骨组织。超速离心得到的细胞外囊泡具有典型外泌体样结构,Western blot鉴定显示具有外泌体特征性蛋白标志物。结论全骨髓培养方法使得小鼠BM-MSCs的损失最少,低氧(5%O2)环境下的差速贴壁法使得小鼠BM-MSCs增殖速度快,纯度高。该方法培养的小鼠BM-MSCs可稳定分泌外泌体囊泡,为小鼠MSCs的培养及其外泌体获取提供了良好的方法。
类器官的研究现状及其作为临床前模型的应用
郭正昌;周波;体外培养的类器官主要由成体干细胞和多能干细胞分化而来。现已培养出肠道、泌尿生殖系统、脑、肝脏等多种类型的类器官。作为一种新兴的模拟人体器官发育及疾病发生发展过程的研究模型，已在疾病建模、筛选抗癌药物、药物开发、基因及细胞疗法中得到广泛的应用。该文主要针对培养体系成熟类器官的研究现状及类器官作为疾病的临床前模型的应用作一综述。
采用高速离心及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体比较及鉴定
韩金秀;李宏远;撒亚莲;严丹;贺继刚;比较及鉴定超高速离心法及ExoQuick-TC法提取小鼠骨髓间充质干细胞来源外泌体。采用BCA蛋白检测可见ExoQuick-TC法提取的外泌体蛋白含量高于超高速离心法提取的蛋白含量。Exosome Antibodies,Array&ELISA Kits检测可见ExoQuick-TC法提取外泌体的纯度优于超高速离心法提取的纯度。两种方法提取的外泌体电镜下形状无差异,随机选取3个电镜视野进行计数可见ExoQuick-TC法提取外泌体数量多于超高速离心法提取外泌体。ExoQuick-TC法提取的外泌体具有更高的产量及纯度。
成像流式细胞术在检测巨噬细胞吞噬肿瘤细胞中的应用
方亦龙;韩大飞;檀学文;许振;蒋海峰;涂佳杰;魏伟;分别用Cytomics FC500型流式细胞仪和ImageStreamX MarkⅡ成像流式细胞仪检测小鼠来源RAW264.7细胞转染对照组NC mimics和微小RNA-22 (miR-22) mimics之后吞噬鼠源胶质瘤细胞系GL261的百分比,并观察两种检测技术检测结果的相关性和一致性。结果显示,两种流式细胞术测得的RAW264.7细胞(NC mimics组和miR-22 mimics组)吞噬GL261细胞的比例的相关性良好(R2>0.8),两者结果差异有统计学意义(P<0.05)。Bland-Altman法分析两种检测技术测得RAW264.7细胞(NC mimics组和miR-22 mimics组)吞噬GL261细胞的比例偏倚较小,分别为4.289%和8.073%。与对照组NC mimics比较,miR-22 mimics组RAW264.7细胞吞噬肿瘤细胞能力增加(P<0.05),成像流式细胞术还可获得吞噬过程的单个细胞图片。经典流式细胞术操作方便,速度较快,而成像流式细胞术建立在传统流式细胞术基础之上,实现了对细胞图像进行多参数量化分析,能获得全新的细胞形态统计。
基于网络药理学方法初探葛花解酒涤脂汤抗酒精性脂肪肝作用
吴雪莉;冯晓;郝杰;易旭;目的基于网络药理学方法初探葛花解酒涤脂汤(GJDD)治疗酒精性脂肪肝(AFLD)的潜在活性化合物及其可能的作用靶点。方法建立GJDD药物-化合物数据集、化合物-靶点数据集、AFLD靶点数据集,构建GJDD抗AFLD的"中药-化合物-靶点"交互网络图,并通过Cytoscape软件对网络进行分析,初探GJDD抗AFLD的潜在活性化合物及其可能的作用靶点。结果 GJDD可能作用于PIK3CA、PIK3R1、MAPK1、APP等靶点,并通过炎症相关信号通路、激素相关通路、凋亡相关信号通路等多条通路达到其治疗目的。结论该研究通过网络药理学再次肯定了GJDD治疗AFLD的有效性,为进一步研究AFLD发生及GJDD干预作用机制提供重要指导。
基于基因组学与代谢组学分析肠道菌群及其代谢物改变与心力衰竭发生的相关性
李丽;张昕;邹琳;目的 探讨肠道菌群及其代谢物改变是否参与大鼠心衰的发生、发展。方法 采用皮下注射异丙肾上腺素的方法诱导大鼠心衰模型，饲养6周后用超声心动图评估模型是否成功，并分为2组：心衰组和对照组。高效液相色谱串联质谱法测定两组大鼠血清中氧化三甲胺(TMAO)水平；收集两组粪便样本进行细菌DNA提取，并行16SrDNA高通量测序，使用NovoMagic云平台进行肠道菌群多样性、相对丰度、差异物种及菌群功能差异分析。结果 与对照组比较，心衰组血清中TMAO水平明显升高(P<0.05),两组粪便标本的测序结果显示：在门水平上，占前3位菌种的包括厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门；在属水平上占前3位的菌种为乳杆菌属、Allobaculum属、杜氏杆菌属；两组菌群的多样性分析显示，心衰组与对照组大鼠肠道菌群结构相似；t检验组间物种差异分析图显示心衰组明显降低的菌群前5位为：Acidobacteriota门、维鲁士菌门、硝化螺旋菌门、Methylomirabilota门、泉古菌门(P<0.05)。其他菌群的比较差异无统计学意义(P>0.05)。LEfSe分析显示心衰组与对照组间具有显著差异(LDA绝对值>4)的菌种为鼠乳杆菌、Acidobacteriota、Bacteria。结论 肠道菌群变化及其代谢物TMAO水平改变参与心衰的发生、发展。
虎杖来源外泌体的提取、纯化及鉴定技术
吴嘉宇;张泓;目的 探究虎杖外泌体的提取、纯化与鉴定方法，获得高纯度外泌体，为其功能研究奠定可靠的材料基础。方法 通过超速离心结合蔗糖密度梯度离心法，从新鲜虎杖中提取外泌体，并利用透射电镜(TEM)观察其形貌、纳米颗粒追踪分析(NTA)分析粒径分布及浓度，Zeta电位测定表面电荷。结果 虎杖外泌体为茶托状或圆形的双层囊泡结构，粒径集中在100～200 nm范围内，符合植物外泌体的特征。其表面均带负电荷，且根的外泌体Zeta电位绝对值略高于茎叶。结论 成功提取与纯化虎杖外泌体，并鉴定其形态、粒径分布及电位特性，为后续进一步探索其活性成分及生物学功能奠定良好的材料基础。
孕妇焦虑抑郁共病的症状网络分析研究
巴合达娜·塞力克;孟维翠;王晓婷;苏菲拉·沙拉依丁;姜婷;目的 探究孕妇焦虑抑郁症状各节点之间的关系，并分析症状间的交互作用。方法 采用便利抽样的方法，对某三级甲等医院产科产检的妊娠妇女使用一般资料调查问卷、广泛性焦虑量表(GAD-7)、病人健康问卷抑郁量表(PHQ-9)进行问卷调查，评价被调查对象的焦虑、抑郁水平，根据孕妇焦虑与抑郁症状间的关系构建网络，进行网络分析。结果 1 742例研究对象中，有焦虑情绪问题者476例(27.3%),抑郁情绪290例(16.6%),焦虑抑郁共病(CAD)218例(12.5%)。单因素分析结果显示，孕妇的年龄、受教育程度、职业、孕周、孕期睡眠情况、孕期锻炼情况、是否饮酒、是否了解孕期知识、是否计划内妊娠、居住环境、夫妻关系、公婆关系、父母关系在是否患有CAD上差异有统计学意义(均P<0.05);在孕妇焦虑抑郁症状网络中，节点PHQ2(感到心情低落、沮丧或绝望)与GAD6(变得容易烦恼或易被激怒)、PHQ8(行动或说话速度缓慢或变得比平日更烦躁、坐立不安)以及GAD5(非常焦躁，以致无法静坐)之间的边权重均为0.27。PHQ2的中介性(Bet)为2.648,接近性(Clo)为1.785,强度(Str)为1.439,预期影响度(Exp)为1.439。结论 节点PHQ2与GAD6、PHQ8与GAD5相关性最强；节点PHQ2在整个网络中对其他症状影响较大，是该网络的核心症状，更多地参与症状间互动，具有预测其他症状的作用。以节点PHQ2为干预靶点，制定有效的治疗方案，为深入了解孕期焦虑与抑郁症状的关联机制及其临床意义提供新的思路。
抑郁症线粒体相关机制的研究进展
蒋梦若;王立源;盛慧;抑郁症是一种危害个体身心健康并造成家庭社会严重负担的精神神经系统疾病，其发病机制尚不十分明确。近年来的研究发现，抑郁症患者体内线粒体结构和功能异常，包括线粒体能量代谢障碍和线粒体质量控制体系失调等，目前针对调节线粒体功能的抗抑郁治疗手段也不断更新。现从线粒体能量代谢过程、线粒体质量控制体系和针对前两者的抗抑郁治疗手段三方面，综述线粒体与抑郁症的内在关联，为完善抑郁症发病机制和发掘抗抑郁治疗的新靶点提供新视角。
胆石症的形成机制及外科治疗现状
滕金豪;陈伟棠;潘孟;李敏朋;罗艳萍;俞渊;胆石症是肝胆外科的临床常见疾病，其发病机制复杂，复发率高，手术取石是胆石症的主要治疗手段。近年研究发现，病理性胆汁形成及胆道动力学改变是胆道结石形成和复发的关键环节，且随着科学技术的进步，外科取石手段也愈加多样化，临床中为达到更优疗效，会根据发病部位及不同取石方式的特点，从而制定对应的外科治疗方案。本文现就胆石症的形成机制与外科治疗现状进行综述。