乙酰唑胺抑制自噬对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、凋亡和炎症反应的影响
王梦晴;张曼玉;顾胜龙;黄艳;李荣;目的 研究水通道蛋白1(AQP1)抑制剂乙酰唑胺(AZ)对类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)增殖、凋亡和炎症反应的影响及其潜在机制。方法 使用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的RA-FLS作为体外RA模型。采用MTT法、IF染色及EdU掺入实验研究AZ对RA-FLS增殖的影响。通过Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术及线粒体膜电位实验检测细胞凋亡情况。使用ELISA和实时定量PCR法检测促炎因子的水平。通过IF染色及mCherry-GFP-LC3B斑点实验评估细胞自噬水平。Western blot检测与自噬、凋亡及增殖相关的蛋白表达。通过联合使用自噬激活剂雷帕霉素(RAPA)或自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA),探讨抑制自噬在AZ治疗RA-FLS中的作用。结果 AZ剂量依赖性地抑制RA-FLS增殖，促进其凋亡，并减少促炎细胞因子的产生。AZ抑制RA-FLS中的保护性细胞自噬，表现为LC3B水平降低(P<0.05)、p62表达增加(P<0.05)、自噬流减少(P<0.01)。此外，AZ的上述体外作用在RAPA诱导的自噬激活下被逆转，并在3-MA诱导的自噬抑制下得到增强。结论 AZ通过抑制细胞保护性自噬改善RA-FLS的过度增殖、凋亡抵抗和异常炎症反应，揭示了自噬抑制在AZ抗RA疗效中的核心作用。
小白菊内酯通过调控CCL2介导肿瘤相关巨噬细胞表型极化抑制胆囊癌细胞恶性进展
李鸿晨;哈力木拉提·吾布力卡斯木;陈骏;目的 探究小白菊内酯(PTL)调节肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化抑制胆囊癌细胞恶性进展的作用及分子机制。方法 将M0型巨噬细胞与人胆囊癌细胞GBC-SD共培养，并加入PTL干预，分为对照组、TAM组、TAM+PTL组，流式细胞术检测巨噬细胞中CD86和CD206水平，RT-qPCR和Western blot检测CD163、白细胞介素-10(IL-10)和精氨酸酶-1(Arg-1)表达；ELISA和Western blot检测GBC-SD细胞上清液中CC类趋化因子配体2(CCL2)分泌量及细胞中CCL2表达。通过CCL2过表达载体转染GBC-SD细胞，分为TAM组、TAM+PTL组、TAM+PTL+OE-NC组、TAM+PTL+OE-CCL2组，流式细胞术检测巨噬细胞中CD86和CD206水平，RT-qPCR和Western blot检测CD163、IL-10和Arg-1表达；CCK-8法、平板克隆形成、Transwell小室实验分别检测GBC-SD细胞增殖、迁移与侵袭。结果 与TAM组比较，TAM+PTL组巨噬细胞中CD86表达增加、CD206表达减少，CD163、IL-10、Arg-1 mRNA及蛋白表达量下调，GBC-SD细胞中CCL2含量降低且CCL2蛋白表达量下调，细胞增殖活性及克隆形成数目、迁移与侵袭数目均减少(P<0.05);与TAM+PTL组比较，TAM+PTL+OE-CCL2组巨噬细胞中CD86表达减少、CD206表达增加，CD163、IL-10、Arg-1 mRNA及蛋白表达量上调，细胞增殖活性升高，克隆形成数目、迁移与侵袭数目均增加(P<0.05)。结论 PTL通过下调胆囊癌细胞中CCL2表达，进而抑制TAM中巨噬细胞向M2型极化，阻止胆囊癌细胞增殖、迁移及侵袭。
LncRNA RMRP通过调控miR-766-5p对氧糖剥夺/再灌注诱导的小鼠HL-1心肌细胞铁死亡的影响
何蕾;孙兴兰;吴应兴;许源;彭翔;胡晨恺;目的 探讨长链非编码RNA RMRP(LncRNA RMRP)通过调控miR-766-5p对氧糖剥夺/再灌注(OGD/R)诱导的小鼠HL-1心肌细胞铁死亡的影响及机制。方法 体外培养HL-1细胞，并构建OGD/R模型，qRT-PCR检测不同再灌注时间点HL-1细胞中LncRNA RMRP表达水平。将LncRNA RMRP小RNA干扰片段(si-RMRP)及其阴性对照(si-NC)、miR-766-5p抑制剂(miR-766-5p inhibitor)及其阴性对照(inhibitor-NC)转染至HL-1细胞中，再进行OGD/R处理。CCK-8检测细胞存活率；试剂盒检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)水平及细胞中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽(GSH)和亚铁离子(Fe2+)水平；qRT-PCR检测细胞中LncRNA RMRP和miR-766-5p表达水平；Western blot检测细胞中铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、铁蛋白重链1(FTH1)表达水平；双荧光素酶报告基因实验检测LncRNA RMRP与miR-766-5p之间的海绵吸附关系。结果 HL-1细胞中LncRNA RMRP表达水平随着再灌注时间的延长逐渐升高(P<0.01)。OGD/R处理可降低HL-1细胞存活率及细胞中miR-766-5p表达水平(P<0.01);提高上清液中LDH及细胞中MDA和Fe2+含量，抑制细胞中SOD和GSH活性(P<0.01);同时下调细胞中GPX4、SLC7A11和FTH1蛋白表达水平(P<0.01)。沉默LncRNA RMRP可提高OGD/R诱导后HL-1细胞的存活率及细胞中miR-766-5p表达水平(P<0.01);降低上清液中LDH和细胞中MDA和Fe2+含量，增加细胞中SOD和GSH活性(P<0.01);同时上调细胞中GPX4、SLC7A11和FTH1蛋白表达水平(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验证实，LncRNA RMRP可海绵吸附调控miR-766-5p表达，且抑制miR-766-5p表达可部分抵消LncRNA RMRP沉默对OGD/R诱导的HL-1细胞铁死亡的改善作用。结论 沉默LncRNA RMRP可抑制OGD/R诱导的HL-1细胞铁死亡，其作用机制与海绵吸附调控miR-766-5p表达有关。
胃癌铁死亡相关基因预后模型及实验验证
张钊;田洪军;丁克硕;朱勇;林峰;杨思佳;王文斌;目的 确定与胃癌预后相关的铁死亡基因，并探索这些基因的潜在分子功能。方法 TCGA数据库中提取胃癌患者癌组织和癌旁组织基因表达和临床信息，R软件中的“DESeq2”包进行铁死亡基因的差异表达分析。基于LASSO算法的Cox回归分析确定关键基因及构建胃癌预后模型；风险评分中位数确定胃癌高低风险组；Kaplan-Meier生存曲线分析和ROC曲线分析评估模型准确性；“CIBERSORT”包确定胃癌患者免疫细胞浸润情况；胃癌及癌旁组织样本检测预后差异表达基因(DEGs)的mRNA表达；体外实验验证羟基羧酸受体1(HCAR1)对胃癌恶性生物学行为的影响。结果 基于TCGA数据库与铁死亡相关基因构建了新型预后模型。在训练和验证队列均显示出强大的生存预测能力。8对胃癌和癌旁组织RT-qPCR显示，6个预后DEGs在癌组织中的表达与模型预测一致。体外实验证实，降低关键基因HCAR1表达可抑制胃癌细胞增殖、侵袭及转移。结论 铁死亡相关基因构建的预后模型具有稳定的预测能力，可以判断胃癌患者的预后情况和生存率。
基于网络药理学和动物实验初探芜菁治疗肺纤维化的作用机制
孙铭雨;刘桂花;郭君婷;程爱斌;辛婧;苗庆芳;高瑞娟;门秀丽;目的 基于网络药理学及动物实验探讨芜菁改善肺纤维化(PF)的活性成分、关键靶点及作用机制。方法 通过中药系统药理数据库与分析平台数据库筛选芜菁活性成分及作用靶点，联合在线人类孟德尔遗传数据库(OMIM)、药物数据库(DrugBank)等疾病数据库获取PF相关靶点，取交集后构建蛋白-蛋白互作(PPI)网络筛选核心靶点，并开展基因本体论(GO)/京都基因和基因组百科全书(KEGG)通路富集分析。动物实验采用博来霉素(BLM)诱导PF小鼠模型，通过HE和Masson染色评估肺组织病理变化，qRT-PCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)mRNA表达，免疫荧光染色检测TNF-α、PI3K、AKT1蛋白表达。结果 芜菁中鉴定出的68种活性成分可能通过作用于TNF-α、AKT1等89个潜在靶点，调控PI3K-Akt等信号通路。动物实验结果显示，芜菁多糖(BRPs)可显著减轻BLM诱导的小鼠PF程度；肺组织HE和Masson染色表明，与BLM组相比，BLM+BRPs组肺泡结构破坏减轻，炎症细胞浸润明显减少，胶原纤维沉积显著下降。进一步机制研究表明，BRPs能够显著下调PF小鼠肺组织中TNF-α、PI3K、AKT1的mRNA和蛋白表达水平。结论 芜菁通过“多成分-多靶点-多通路”的方式协同改善PF;BRPs是芜菁主要活性成分之一，并通过抑制TNF-α/PI3K-Akt信号通路发挥抗PF作用。
MAGED4通过SIRT7激活PI3K/AKT信号通路促进胶质瘤细胞增殖
叶爱;钟子亮;李枫;谢欢;邹小琼;王国鉴;王紫;罗彬;张庆梅;谢小薰;目的 分析黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4)和去乙酰化酶7(SIRT7)在胶质瘤中的表达情况及二者之间的相关性，探讨MAGED4和SIRT7对胶质瘤细胞增殖的潜在作用。方法 通过中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)、人类蛋白质图谱(HPA)和UALCAN数据库分析MAGED4和SIRT7表达水平及二者的相关性；采用生存分析、ROC曲线分析和Cox回归分析MAGED4和SIRT7对胶质瘤患者预后的影响；采用基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路富集分析探究胶质瘤中MAGED4和SIRT7的生物学功能；采用Western blot法探讨MAGED4蛋白是否通过SIRT7对磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)和蛋白激酶B(AKT)信号通路的活性产生调控作用；通过CCK-8法探究MAGED4通过SIRT7对胶质瘤细胞增殖的影响。结果 CGGA、UALCAN和HPA数据库分析结果显示，胶质瘤组织中MAGED4和SIRT7表达水平均高于正常脑组织(P<0.05),且二者表达呈正相关；生存分析、ROC曲线分析和Cox回归分析结果显示，MAGED4和SIRT7高表达是胶质瘤预后不良的危险因素；KEGG富集分析结果显示，MAGED4和SIRT7可能参与胶质瘤中PI3K/AKT信号通路的调控；Western blot结果显示，MAGED4通过SIRT7激活PI3K/AKT信号通路；CCK-8结果显示，MAGED4通过SIRT7促进胶质瘤细胞增殖。结论 MAGED4和SIRT7在胶质瘤中高表达且与胶质瘤预后不良相关，MAGED4通过SIRT7激活PI3K/AKT信号通路促进胶质瘤细胞增殖。
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