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2026年06期
基础医学研究

IL9-2G1兔单克隆抗体的人源化改造

周昌红;薛梓萌;涂佳杰;王鑫铭;

目的 对IL9-2G1兔单克隆抗体(IL9-2G1 mAb)进行可变区人源化改造,并鉴定其生物学活性。方法 设计IL9-2G1mAb的人源化抗体序列,对抗体重链可变区(VH)与轻链可变区(VL)进行人源化改造,同时构建至含有人源IgG1亚型、IgKappa亚型恒定区骨架载体模板,采用中国仓鼠卵巢细胞(CHO)表达系统进行纯化实验,酶联免疫吸附试验(ELISA)对抗体与抗原结合活性进行定性分析,筛选出最优人源化抗体后进行表面等离子体共振(SPR)亲和力检测。Western blot检测rIL-9组与rIL-9+hIL-9 mAb组对Janus激酶1/信号转导与转录激活因子3(JAK1/STAT3)磷酸化的影响,ELISA检测Th9组与Th9+hIL-9mAb组对白细胞介素-9(IL-9)分泌的影响。结果 纯化及ELISA显示,重链OH与轻链FL兼容性及表达良好;SPR结果显示,M501042-OHFL与分析物M30903的平衡解离常数(KD)为1.33×10-7 mol/L,优于亲本2G1抗体;Western blot结果显示,与rIL-9组相比,rIL-9+hIL-9 mAb组中磷酸化JAK1(p-JAK1)与磷酸化STAT3(p-STAT3)水平显著下调(P<0.01);ELISA结果显示,与Th9组相比,Th9+hIL-9 mAb组中IL-9分泌显著下调(P<0.01)。结论 对IL9-2G1兔单克隆抗体可变区进行人源化改造,成功构建获得亲和力高、结合稳定性强的hIL-9 mAb OHFL,为后续研究提供实验基础。

2026 年 06 期 v.61 ; 国家自然科学基金项目(编号:82104185); 安徽省高校科研项目(编号:2022AH051153); 安徽省自然科学基金项目(编号:2008085QH400)~~
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肿瘤相关巨噬细胞分泌的IL-8对结直肠癌转移的影响

苏雅;袁路云;张强;王海静;

目的 探讨肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)分泌的白细胞介素(IL)-8在结直肠癌(CRC)转移中的作用及其潜在治疗价值。方法 通过佛波酯(PMA)联合IL-4/IL-13构建TAMs模型,采用流式细胞术、RT-qPCR和ELISA验证模型表型。用巨噬细胞M0及TAMs条件培养基(CM)处理人源CRC细胞HCT116,通过划痕实验、Transwell实验评估细胞转移能力。Western blot、RTqPCR及ELISA实验检测巨噬细胞M0及TAMs中IL-8表达水平。用Western blot和RT-qPCR检测经CM-M0及CM-TAM处理后的HCT116细胞中上皮-间质转化(EMT)标志物(E-cadherin、N-cadherin)表达水平。在CM-TAMs中加入IL-8受体抑制剂Reparixin后刺激HCT116细胞,通过划痕实验、Transwell实验评估细胞转移能力,用Western blot和RT-qPCR检测E-cadherin、Ncadherin表达水平。最后,采用鼠源结直肠细胞CT26-LUC构建脾注射肝转移模型,用活体成像观察Reparixin对该动物模型的影响。结果 流式细胞术显示TAMs模型中的M2型巨噬细胞(CD11b~+CD206+细胞)比例升高,RT-qPCR和ELISA实验显示M2型巨噬细胞的标志物IL-10和TGF-β明显升高。划痕实验、Transwell实验显示CM-TAMs显著增强HCT116细胞的迁移、侵袭能力。Western blot、RT-qPCR及ELISA实验显示TAMs高表达IL-8,同时诱导HCT116细胞下调E-cadherin表达水平并上调Ncadherin表达水平。Reparixin不仅可以逆转CM-TAMs的促转移作用,同时上调HCT116细胞中E-cadherin表达水平并下调Ncadherin表达水平,还可以在脾注射肝转移模型中减少小鼠肝转移灶的生物发光信号强度。结论 TAMs通过分泌IL-8诱导EMT促进CRC转移,抑制TAMs分泌IL-8或抑制IL-8与其受体结合,可能为CRC治疗提供新方向。

2026 年 06 期 v.61 ; 国家自然科学基金项目(编号:82505694); 上海市第六人民医院医疗集团科研基金项目(编号:24-LY-02)~~
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DIP2B对胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

黄浩宇;杨辉;谢泽航;邬振国;吕坤;

目的 探究Disco相互作用蛋白2同源物B(DIP2B)在胃癌细胞增殖、迁移和侵袭中的作用。方法 基于TCGA、GEPIA和TIMER 2.0公共数据库进行生物信息学分析,评估DIP2B在胃癌中的表达特征及临床预后价值;采用Western blot和RTqPCR检测胃癌细胞系中DIP2B的表达情况;通过siRNA介导的基因沉默技术,构建DIP2B低表达细胞模型,并验证敲低效率;使用实时无标记动态细胞分析技术(RTCA)和克隆形成实验检测细胞增殖能力;采用Transwell迁移/侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力;运用流式细胞术检测细胞凋亡和周期变化。结果 DIP2B在胃癌细胞中显著高表达,且与患者不良预后相关(P<0.05);实验结果表明,DIP2B敲低显著抑制胃癌细胞的增殖能力、减弱迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡并阻滞细胞分裂(P<0.05)。结论 DIP2B在胃癌中高表达且与不良预后相关,敲低DIP2B可抑制胃癌细胞增殖、迁移和侵袭能力,并促进凋亡,提示DIP2B可能作为胃癌潜在的预后标志物及治疗靶点。

2026 年 06 期 v.61 ; 国家自然科学基金项目(编号:82072370); 安徽省自然科学基金杰青项目(编号:2408085JX011)~~
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雷帕霉素光敏纳米盘的制备及体外抗卵巢癌活性评价

张魁枝;卢光照;鲁莹;余史丹;张黎;

目的 制备负载雷帕霉素的光敏纳米盘,并评价其体外抗卵巢癌活性。方法 采用薄膜水化法制备纳米盘,通过动态光散射和透射电子显微镜表征其粒径、电位和形貌;建立高效液相色谱法测定雷帕霉素含量,并验证方法专属性、线性、精密度、重复性、稳定性与加样回收率。通过单线态氧检测探针与反向透析法,分别评估了纳米盘在近红外光下的单线态氧生成与光控释药性能。通过检测细胞代谢活性,评估纳米盘对人卵巢癌细胞OVCAR-8的杀伤作用。采用共聚焦显微镜与流式细胞术,分别对纳米盘的细胞摄取行为及其内吞机制进行探究。结果 纳米盘粒径为(63.66±0.27)nm,电位为(-18.2±2.4)mV,稳定性良好。透射电镜结果显示其具有类球状或短棒状形态。雷帕霉素在0.2~40μg/mL的浓度范围内峰面积线性良好(R2=0.999 9),精密度、重复性和回收率的相对标准偏差均小于5%。在近红外光照射下,纳米盘可有效产生单线态氧;同时,单线态氧可诱导脂质膜氧化,进而显著促进雷帕霉素的响应性释放(P<0.001)。纳米盘本身无显著细胞毒性,而经近红外光照射后对卵巢癌细胞的毒性显著增强。细胞摄取实验证实,纳米盘主要通过网格蛋白介导的能量依赖型内吞途径进入细胞(P<0.001),光照后可触发药物释放。结论 成功制备雷帕霉素光敏纳米盘,其在体外表现出显著的光控释药特性及增强的抗卵巢癌活性。

2026 年 06 期 v.61 ; 上海市自然科学基金项目(编号:23ZR1477500)~~
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CD151 YXXφ基序点突变体通过囊泡内化再循环调控血管通透性的机制研究

姜树芃;范诗浪;蒋卢映;章子璇;季萌萌;左后娟;刘竟搏;

目的 探究CD151 YXXφ基序点突变体是否通过调控囊泡内化再循环过程影响血管通透性。方法 采用CD151基因敲除(KO)与野生型(WT)小鼠,通过改良Miles实验比较两组小鼠在血管内皮生长因子A(VEGF-A)刺激下背部及耳后皮肤的血管通透性。构建CD151 YXXφ基序点突变体YALA,利用腺病毒转染至人内皮细胞EA. hy926,设立多个实验组,检测基础条件及VEGF-A刺激下内皮细胞单层对异硫氰酸荧光素标记的葡聚糖(FITC-dextran)的通透性;采用蛋白质免疫印迹(WB)、RTqPCR及免疫荧光技术检测血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达与分布;通过细胞表面生物素化实验定量比较VE-cadherin的内吞率;使用鬼笔环肽标记纤维状肌动蛋白(F-actin),观察细胞骨架张力变化。结果 Miles实验显示,在VEGF-A刺激下,KO组小鼠背部及耳后皮肤染料渗出量高于WT组(均P<0.05)。在VEGF-A刺激60 min和120 min后,过表达YALA突变体的内皮细胞单层对FITC-dextran的通透性增高(P<0.05)。WB与RT-qPCR结果显示,YALA突变体不影响VE-cadherin的总蛋白及mRNA表达水平。免疫荧光结果显示,YALA突变体破坏VEGF-A刺激下VE-cadherin在细胞膜上的连续分布及其与CD151在核周区域的共定位。细胞表面生物素化实验证实,YALA突变体降低VE-cadherin的内吞率(P<0.05)。细胞骨架染色显示,YALA突变体导致内皮细胞肌动蛋白骨架形成粗大张力丝,提示细胞收缩。结论 CD151 YXXφ基序点突变影响内皮细胞囊泡内化再循环、影响VE-cadherin的表达与内化活动,进而影响血管通透性。

2026 年 06 期 v.61 ; 国家自然科学基金项目(编号:81873535); 湖北省自然科学基金项目(编号:2020CFB573)~~
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负载表没食子儿茶素没食子酸酯的水凝胶支架用于牙周炎治疗的实验研究

刘龙阁;毛静;郑慧敏;李为;

目的 探讨负载表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的透明质酸(HA)/丝素蛋白(SF)复合水凝胶支架的结构特性、生物相容性及抗炎抗氧化性能,为牙周炎的治疗提供新的材料基础。方法 通过交联HA与SF构建复合水凝胶支架,并负载EGCG。检测材料吸水率、降解性及采用扫描电镜表征材料特性,通过体外实验评估其细胞相容性及抗炎抗氧化性能。结果 负载EGCG的支架呈现多孔网状结构,具备良好溶胀性能;体外实验显示该支架具有良好的生物相容性,同时抑制炎症因子表达并清除活性氧。结论 基于HA/SF-EGCG的复合支架兼具优良生物相容性和抗炎抗氧化双重功能活性,为提升牙周炎临床治疗效果提供新策略。

2026 年 06 期 v.61 ; 安徽省卫生健康科研项目(编号:AHWJ2023A20332)~~
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